反応は、免疫血清を添加することにより、試験物質中の病原体の抗原を検出するために実行されます。 相同抗原の存在下では抗体結合が起こるため、抗原感作赤血球を添加した後は凝集が起こらず、陽性と評価されます。 反応の感度を高めるために、特定の免疫血清を最小限の量（2血球凝集単位）で試験物質に添加します。 免疫血清の力価は、RNGAを使用して事前に決定されています。 1つの血球凝集ユニットについて、赤血球の凝集を引き起こす血清の限界希釈を取ります。

方法論。 正常ウサギ血清の1％溶液0.025 mlをポリスチレンプレートまたは凝集チューブのウェルに加え、試験物質の2倍段階希釈を行います。 次に、0.025 mlの免疫血清をすべてのウェルに加え、プレートを振とうし、37℃の温度で30分間、または室温で1時間放置します。 さらに、0.025 mlの抗原診断薬をすべてのウェルに加え、振とうして2時間放置した後、結果を考慮に入れます。

この反応を実行するとき、免疫血清特異性コントロールは、特定の抗原、免疫血清（2、1、0.5血球凝集単位）および感作赤血球の懸濁液からなるRNGAのコントロールに追加されます。

RTNGAは、特定の抗体（完全およびブロッキング）の検出にも使用されます。この抗体には、一定量の抗原がテスト血清に追加されます。 抗体が含まれている場合、それらは抗原によって結合されるため、抗体で感作された赤血球の添加後（RTNHAの第2段階）、赤血球はくっつきません。

最小量の抗原（2回の中和用量）を使用するため、反応は非常に敏感です。 抗原調製物中の中和用量の数は、RNGAを使用して決定され、抗原の連続2倍希釈は、正常なウサギ血清の1％溶液で行われ、抗体赤血球診断薬がウェルに追加されます。 抗原の中和用量はその最大希釈であり、感作された赤血球の完全な接着をもたらします。

反応前に、試験血清を1：5-1：10に希釈し、56℃の温度で30分間不活化します。 血球凝集素を吸着させるために、製剤化または新たに洗浄したラム赤血球の50％懸濁液を、希釈血清1mlあたり0.1mlの懸濁液の割合で血清に添加します。 混合物を振とうし、37℃で30分間または室温で1時間インキュベートし、その後、遠心分離によって赤血球を沈殿させる。 赤血球を沈殿させるために、血清を翌日まで冷蔵庫に置いておくことができます。

実験中、試験材料は、マイクロタイターパネルのウェル内で0.025mlの容量の正常ウサギ血清の1％溶液で希釈されます。 次に、0.025mlの量の2つの中和用量の抗原を各ウェルに加える。 プレートを振とうし、37℃で30分間または室温で1時間放置します。 次に、0.025mlの抗体赤血球診断薬をすべてのウェルに加えます。 プレートを振とうし、室温で1.5〜2時間インキュベートした後、反応結果を考慮に入れます。 会計は翌日にも行うことができます。 研究された血清の力価は、赤血球がくっつかない最大希釈であると考えられています。

経験には、次の種類の制御が伴います。

1）感作赤血球の安定性（赤血球+正常ウサギ血清の1％溶液）;

2）各試験血清中の血球凝集素の枯渇の完全性（最小希釈の試験血清+ホルマリン化赤血球）。

3）抗原の最小中和用量を決定することの正確さ（抗原+抗体赤血球診断の中和用量の2、1および0.5）。

逆反応 間接赤血球凝集（ロンガ）は、試験材料中の細菌およびウイルス抗原を示すため、および多くの感染症の明白な診断のために使用されます。

RNHAとは対照的に、この反応では、赤血球は抗原ではなく、抗原が添加されたときに凝集が起こる抗体によって感作されます。

赤血球は、ホルマリンまたはグルタルアルデヒドで事前に固定された後、免疫血清から分離され、他の血清タンパク質から精製されたガンマグロブリンに結合します。 赤血球の表面へのガンマグロブリンの結合は、塩化クロムの助けを借りて起こります。 このために、免疫血清から単離された1容量の免疫グロブリン、1容量の正式な赤血球の50％懸濁液、および1容量の0.1〜0.2％塩化クロム溶液を8容量の蒸留水に添加します。 混合物を室温で10〜15分間放置した後、赤血球を受動的血球凝集反応のように処理します。

抗体診断の特異性は、相同抗原による受動的血球凝集の阻害の反応でチェックされます。 反応は、同種の抗原によって少なくとも16倍阻害されなければならず、異種の抗原によって阻害されてはなりません。 自発的な血球凝集がない場合は、コントロールを使用してください。

この反応の助けを借りて、病原体は、死んだ人や動物の臓器、たとえば脳、脾臓、肺の肝臓から採取された材料に示されます。 これらの臓器の10％懸濁液を等張塩化ナトリウム溶液で調製し、10,000 rpmで30〜60分間遠心分離し、上清を抗原として使用します。

方法論。安定化溶液で試験物質（抗原）の2倍希釈液を準備します。 マイクロアレイの3つの隣接するウェルに各抗原希釈液を1滴滴下します（反応には3列のウェルが平行になります）。 最初の列の各ウェルに1滴の安定化溶液を加え、1：10の希釈で1滴の同種免疫血清を2列目のウェルに加え、1滴の異種免疫血清を3行目。 2行目と3行目は、反応の特異性のコントロールとして機能します。 混合物を室温で20分間放置する。

感作赤血球（赤血球抗体診断）の1％懸濁液を1滴すべてのウェルに加え、プレートを完全に振とうします。 反応の結果は、30〜40分後に考慮されます。 特定の抗原の存在下では、血球凝集は1列目と3列目（異種血清を含む）で認められ、抗原が以前に相同血清で中和された2列目では見られません。

反応は、自発的凝集のための感作赤血球の制御を伴う。

逆間接赤血球凝集抑制反応（RTONGA）人間と動物の血清中の抗体の存在を決定することができます。

方法論。 血清を等張塩化ナトリウム溶液で10倍に希釈し、65°Cの温度で20分間加熱して非特異的阻害剤を破壊し、次に血清の2倍希釈液を安定化溶液と抗原含有の作業用量で調製します。 4つの凝集ユニット。 マイクロパネルのウェルに各血清希釈液を1滴加え、抗原を1滴加えます。この希釈液は、作業用量に対応します。 混合物の成分を室温で20分間接触させた後、赤血球抗体診断薬1滴をすべてのウェルに加え、完全に振とうします。 室温で1.5〜2時間インキュベートした後、血球凝集により反応の結果が考慮されます。 血清力価はその最高希釈度であり、4つの抗原凝集ユニットによる血球凝集反応を完全に阻害します。

反応は、以下の存在下での自発的凝集のための感作赤血球の制御を伴う。a）安定化溶液。 b）正常な抗原（ウイルスを含まない材料から）。 c）試験血清。 反応の利点は、その汎用性とさまざまな抗原を検出するためにそれを使用する可能性にあります。

血球凝集の結果の評価。 RNGA、RONGA、およびRTONGAの結果は、赤血球凝集の程度に応じて考慮されます。（++++）-完全凝集。 （+++）-完全ではない凝集; （++）-部分凝集; （+）-凝集の痕跡; （–）–凝集反応がない。

凝集が完全（++++）またはほぼ完全（+++）であり、診断が反応の各成分の存在下で自発的に凝集せず、抗原または抗体の特異性制御が陽性である場合、反応は陽性と見なされます。

間接的または受動的な血球凝集反応（RNHAまたはRPHA）は、凝集反応よりも感度が高く、特異的です。 この反応は2つの方法でも使用されます。

1）患者の血清中の抗体を検出するために、タンニンで処理された赤血球の表面に抗原が吸着される赤血球診断が使用されます。 この反応に関連して、RPHAという用語がより頻繁に使用されます。

試験血清をプラスチックプレートのウェルで希釈し、赤血球診断薬を添加します。 ポジティブな反応では、ウェルの壁に「レースの傘」の形で薄いフィルムが現れ、ネガティブな反応では、「ボタン」の形で赤血球の密な堆積物が現れます。

2）毒素を検出し、 細菌抗原試験材料には、赤血球への抗体の吸着によって得られた抗体赤血球診断薬が使用されます。 この反応に関連して、RNGAという用語がより頻繁に使用されます。 たとえば、抗体診断の助けを借りて、ペスト菌の抗原、ジフテリア外毒素、ボツリヌス外毒素が検出されます。

Coombs反応（アプチグロブリンテスト）

この反応は、不完全な抗体、たとえばRh因子に対する抗体を検出するために使用されます。 試験血清はRh +赤血球に添加され、Rh因子に対する不完全な抗体の存在が予想されます。 赤血球に付着した不完全な抗体は、活性中心が1つしかないため、凝集を引き起こしません。 次に、ヒトグロブリンに対する抗体を含む抗グロブリン血清を追加します。 不完全な抗体と組み合わせると、抗グロブリン血清は赤血球の凝集を引き起こします。

沈殿反応

反応の本質は、特定の抗体の作用下での抗原の沈殿（沈殿）です。 目に見える反応を得るためには、電解質の存在が必要です。 沈殿反応の抗原は分子分散物質です。

リング沈殿反応細い沈殿管に入れます。 免疫血清を試験管に注ぎ、その上に試験物質を注意深く重ねます。 その中に抗原が存在すると、2つの液体の境界に不透明な沈殿物の輪が形成されます。

この反応は、法医学でタンパク質の種類を決定するために使用されます 血痕、精液などで; 炭疽菌（アスコリ反応）、髄膜炎および他の感染症の診断における抗原を決定するため; 衛生および衛生研究において-改ざんを確立するため 食品。 免疫沈降血清は、適切な抗原で動物を免疫することによって得られます。 例えば、ヒトタンパク質を沈殿させる血清は、ウサギをヒトタンパク質で免疫することによって得られます。 沈殿する血清の力価は、それが反応する抗原の最高希釈度です。 血清は通常、希釈せずに使用するか、1：5に希釈して使用します。

寒天ゲル沈殿反応いくつかの方法で実行されます。 これは、二重免疫拡散反応、放射状免疫拡散反応、免疫電気泳動反応です。

二重免疫拡散反応（Ouchterlonyによると）。 溶けた寒天ゲルをペトリ皿に注ぎ、固化後、ウェルを切り出します。 抗原はいくつかのウェルに配置され、免疫血清は他のウェルに配置され、寒天に拡散し、合流点で白い縞の形で沈殿物を形成します。

放射状免疫拡散反応（マンチーニによる）。 溶けた寒天ゲルに免疫血清を加え、皿に注ぎます。 寒天が固化した後、その中にウェルが切り出され、抗原がその中に配置され、寒天に拡散して、ウェルの周りに環状の沈殿ゾーンを形成します。 抗原濃度が高いほど、リングの直径は大きくなります。 この反応は、たとえば、血液中のさまざまなクラスの免疫グロブリンを測定するために使用されます。 クラスIgG、IgM、IgAの免疫グロブリンは、この反応で抗原として機能し、それらに対する抗体は特定の単一受容体血清に含まれています。

免疫電気泳動。タンパク質抗原の電気泳動は寒天ゲルで行われます。 沈殿した血清は、タンパク質の移動方向と平行に走る溝に導入されます。 抗原と抗体は寒天に拡散し、それらの合流点で沈殿線が形成されます。

免疫溶解反応

特定の抗体と結合した抗原（赤血球または細菌）は免疫複合体を形成し、それに補体（C1）が結合し、補体活性化が古典的経路に沿って起こります。 活性化された補体は、赤血球（溶血）または細菌（溶血）を溶解します。 溶菌反応は、コレラ菌を識別するために使用されます。

溶血反応。反応中の抗原は赤血球であり、抗体（溶血素）は溶血性血清に含まれています。 溶血素は赤血球に付着し、補体活性化が起こり、赤血球を溶解します。 赤血球の濁った懸濁液は、透明な真っ赤な液体、つまり「漆の血」に変わります。 溶血反応は補体の存在下でのみ起こるため、補体の検出の指標として使用されます。

ゲル中の局所溶血反応（ジャーン反応）-溶血反応の変形。 脾臓およびリンパ節の抗体形成細胞（AFC）の数を決定するのに役立ちます。

溶けた寒天ゲルを脾臓細胞と赤血球の懸濁液と混合し、寒天が固化した後、補体を加えます。 溶血素を生成する各細胞の周りに、溶血のゾーンが形成されます。 そのようなゾーンの数は、溶血素を生成する細胞の数を決定します。

主題「免疫調節剤。免疫診断学」の目次 感染症.":

拡張凝集反応 (RA）。 患者の血清中のATを決定するには、 拡張凝集反応（RA）。 これを行うために、診断が一連の血清希釈液に追加されます-殺された微生物または吸着されたAgを含む粒子の懸濁液。 与える最大希釈 凝集 Ag、血清の力価と呼ばれます。

凝集反応の種類 (RA）ATを検出する-野兎病の血液ドロップテスト（一滴の血液に診断薬を適用し、目に見える白っぽい凝集物の出現を伴う）およびブルセラ症のハドルソン反応（ドロップにゲンチアナバイオレットで染色された診断薬を使用）血清の）。

おおよその凝集反応（RA）

分離された微生物を識別するために、おおよそのRAがスライドガラスに配置されます。 これを行うために、病原体の培養物を一滴の標準的な診断用抗血清に加えます（1：10、1：20の希釈で）。 結果が陽性の場合、彼らは抗血清の希釈を増やしながら詳細な反応を示します。

反応診断血清の力価に近い希釈で凝集が観察された場合、陽性と見なされます。

OAS. 体細胞O-Agそれらは熱的に安定しており、2時間の沸騰に耐えます。ATと相互作用すると、それらは細粒の凝集体を形成します。

N-Ag. H-Ag（鞭毛虫）熱に不安定で、100°Cで、またエタノールの作用下で急速に破壊されます。 H-抗血清との反応では、2時間のインキュベーション後、緩い大きなフレークが形成されます（バクテリアがべん毛と一緒に付着することによって形成されます）。

Vi Ar腸チフス菌は比較的熱安定性があります（60-62°Cの温度に2時間耐えます）。 Vi-抗血清とインキュベートすると、細粒の凝集物が形成されます。

直接血球凝集反応

これらの中で最も単純なもの 反応 - 凝集 AB0システムの血液型を決定するために使用される赤血球または血球凝集。 決定するため 凝集（またはその不在）抗Aおよび抗B凝集素を含む標準的な抗血清が使用されます。 研究された抗原は赤血球の天然成分であるため、この反応は直接と呼ばれます。

と共有 直接血球凝集メカニズムにはウイルスの血球凝集があります。 多くのウイルスは、鳥類および哺乳類の赤血球を自発的に凝集させることができ、赤血球の懸濁液にそれらを加えると、それらから凝集体が形成されます。

このサイトは、情報提供のみを目的とした参照情報を提供します。 病気の診断と治療は専門家の監督の下で行われるべきです。 すべての薬には禁忌があります。 専門家のアドバイスが必要です！

血清学的 血液検査方法です 実験室研究特定の抗原または抗体（ 特定のタンパク質）体の免疫応答に基づいて患者の血清中。 この方法は、次の場合に適用されます。 診断特定の種類のウイルスまたは細菌に対する患者の血液中の抗体の存在を検出し、血液型を決定するための感染症。

調査中の資料

まず第一に、血清学的分析のために、患者から収集された生物学的材料が使用されます：

• 血清
• 唾液
• 糞便

場合によっては、特定の環境オブジェクトから分離された材料が検査されます。

• 土壌

分析または採血の方法

この分析では、患者の特別な準備は必要ありません。 採血は、朝、空腹時に行われ、一般に認められている血液学的方法に従って、医療機関の治療室で行われます。 血清学的検査では、採血は2つの方法で行われます。静脈血は患者の肘静脈から採取され、毛細血管はから採取されます。 薬指。 血液は無菌の密封された試験管に入れられます。

血液輸送と血清貯蔵の特徴

採血後すぐに専用の検査室に運ばれ、同日に血清が採取されます。 血清の保管は、2〜4度の温度の冷蔵庫で4〜6日以内に許可されています。 より長い保管が必要な場合、血清は凍結されます。 血清の質を損なうことを避けるために、それは一度それを凍結することを許され、それに応じてそれを解凍します。 長期保存中、抗体はその特性を失い、部分的に不活性になります。凍結に対して最も敏感なのは、このクラスの免疫グロブリンです。 M。 血清を解凍した後、均一な塊になるまで完全に混合する必要があります。これは、この血清に含まれる抗体の濃度を回復するのに役立ちます。

血清学は何に使用されますか？

血清学的方法 実験室診断次のような病気を検出するために使用されます エキノコッカス症、旋毛虫症、トキソカラ症、オピストルキス症、嚢虫症、トキソプラズマ症、アメーバ症、ジアルジア症、治療過程の有効性を判断し、最後に、患者が完全に回復した後の病気の再発を検出します。

血清学的診断の基本的な方法

免疫蛍光反応（RIF）

この反応は、血清学的研究の間接的なバージョンです。つまり、2段階で実行されます。 最初の段階では、免疫血清タンパク質と構造が類似している抗グロブリンを使用して、循環する抗原-抗体複合体で必要な抗体が検出されます。 抗グロブリンを使用せずに、蛍光顕微鏡下で事前に調製された抗原調製物を研究する場合にも、所望の抗体の同定が可能である。

蛍光抗体反応は非常に時間のかかるプロセスであり、専門家による多くの時間と責任が必要です。 反応は溶液の調製から始まり、次に血清とその対照サンプルに滴定が行われます（ 試験溶液を制御された量の試薬と徐々に混合することにより、特定の物質の含有量を決定できるプロセス。）。 以前に調製した希釈液とそのコントロールサンプルを、抗原を含むスライドに注意深く適用します。 次に、調製物をインキュベーションにかけ、続いてそれらを洗浄し、空気中で乾燥させる。 抗血清の薄層を抗原含有スライドに適用し、その後、調製物を再インキュベートし、前の一連の作用全体を繰り返し、調製物を乾燥させる。 その結果、スライドガラス上の調製物はグリセロールで処理され、蛍光顕微鏡下で検査されます。

反応の結果は、抗原細胞の表面の黄緑色の輝きの強さによって特徴付けられる4段階で評価されます。
+ 細胞の非常に弱い輝き、その周辺でのみ目立つ
++ 細胞周辺の弱い輝きですが、はっきりと見える緑の色合いがあります
+++/++++ 細胞周辺の明るい緑色の輝き
反応力価は、抗原細胞の少なくとも50％が明確な表面の輝きを示すような血清希釈であると考えられています。つまり、反応の結果です。 +++ また ++++ 。 反応範囲の値は1/80から1/100です。

反応の強さは、形成されたウェルの底に沈殿した赤血球の数に依存します。
– 滑らかなエッジまたは「ボタン」を備えた小さなリングの形でウェルの底に赤血球が沈着することを特徴とする陰性反応。
+ 低強度のこの反応は、穴の底に小さな単一の堆積物があることを特徴としています。 凝集していない赤血球は、ウェルの中央に「小さなリング」を形成します
++ 中程度の強度で、穴の底に凝集していない赤血球の「広く密なリング」が形成されるのが特徴です
+++ 激しい反応により、凝集した赤血球はいわゆる「傘」を形成し、その中心には、沈降した非凝集赤血球によって形成されたリングがはっきりと見えます。
++++ すべての赤血球が凝集し、「傘」を形成して穴の底に並ぶ、鋭く激しい反応。
この反応の力価は、血清の最後の希釈と見なされ、赤血球の明らかな凝集が少なくとも検出されます。 +++ 、つまり、激しいまたは急激に激しい反応を伴います。

血清学的診断法の信頼性と品質は、分析結果の品質を評価するために設計されたいくつかの独立した手順で構成される、内部および外部の検査室管理の組織に依存します。

間接赤血球凝集反応、RNGA
（間接赤血球凝集試験）

抗原または抗体が以前に吸着された赤血球の、相同血清または対応する抗原の存在下で凝集する能力に基づいて、抗原および抗体を検出するための方法。

抗原が検出されると、反応は逆受動赤血球凝集-ROPHA（逆受動赤血球凝集試験）によって示され、抗体が検出されると-受動赤血球凝集-RPHA（受動赤血球凝集試験）によって示されます。 RNHAは、B型肝炎ウイルス感染の血清学的マーカー、特にHBsAgとその抗体の検出に幅広い用途があります。

現在、赤血球の感作方法（タンニン、グルタルアルデヒド、塩化クロム、リバノールなどを使用）、その種（ヒト、ラム、ニワトリ、七面鳥など）が異なる赤血球診断薬の製造方法が開発されています。 。）。）、反応を設定するためのオプション（マイクロタイタープレート、テストチューブ、キャピラリーなど）および結果の記録（視覚的および機器的）。 HBsAgおよび抗HBsを検出するための赤血球診断薬は、国内外の多くの企業や企業によって製造されています。

多くの場合、RNHAはマイクロタイタープレートで実行され、テスト血清とコントロールサンプルの希釈液が事前に準備されます。 赤血球診断の導入とインキュベーションの後、反応の結果が記録されます。 逆さまの「傘」の形をした赤血球凝集が起こるサンプルは、陽性と見なされます。 否定的な反応で、赤血球はリングまたはディスクの形でウェルの底に落ち着きます。

得られた結果の特異性を確認するために、反応は「実験的」赤血球診断（すなわち、抗原または抗体で感作された赤血球）と「対照」診断（すなわち、赤血球は抗原または抗体で感作されない）の両方で実行されます。 。 「コントロール」診断製品による陽性反応の存在は、偽陽性反応を示します。 非特異的反応を排除するために、試験血清は非感作赤血球で処理されます。 RNGAを実施するための前提条件は、中和反応、つまり確認テストです。

RPG、VIEF、RSKなどの方法と比較して、間接赤血球凝集反応の感度は高くなります（200〜400倍）。 したがって、TPHA中のHBsAgは、6〜10 ng / mlの濃度で検出できます。 反応の単純さと迅速さ（20〜30分）により、HBsAgの検出のための輸血サービスにおけるこの方法の広範な使用が決定されました。

赤血球診断薬に加えて、HBsAgおよび抗HBsの検出、ならびに抗HBc、IgMクラスの抗HBc（固相変異体）、HBeAg、A型肝炎ウイルス抗原およびしかし、それに対する抗体は、実際の医療に応用されているわけではありません。