脚部の浮腫

間接的または受動的な血球凝集の反応。血球凝集反応は逆血球凝集反応です。

反応は、免疫血清を添加することにより、試験物質中の病原体の抗原を検出するために実行されます。相同抗原の存在下では、抗体が結合するため、抗原感作赤血球の添加後、それらの凝集は起こらず、これは陽性の結果として評価されます。反応の感度を高めるために、特定の免疫血清を最小限の量（2血球凝集単位）で試験物質に添加します。免疫血清の力価は、RNGAを使用して事前に決定されています。 1つの血球凝集ユニットについて、赤血球の凝集を引き起こす血清の限界希釈を取ります。

方法論。正常ウサギ血清の1％溶液0.025 mlをポリスチレンプレートまたは凝集チューブのウェルに加え、試験物質の2倍段階希釈を行います。次に、0.025 mlの免疫血清をすべてのウェルに加え、プレートを振とうし、37℃の温度で30分間、または室温で1時間放置します。さらに、0.025 mlの抗原診断薬をすべてのウェルに加え、振とうして2時間放置した後、結果を考慮に入れます。

この反応を実行するとき、免疫血清特異性コントロールは、特定の抗原、免疫血清（2、1、0.5血球凝集単位）および感作赤血球の懸濁液からなるRNGAのコントロールに追加されます。

RTNGAは、特定の抗体（完全およびブロッキング）の検出にも使用されます。この抗体には、一定量の抗原がテスト血清に追加されます。抗体が含まれている場合、それらは抗原によって結合されるため、抗体で感作された赤血球の添加後（RTNHAの第2段階）、赤血球はくっつきません。

最小量の抗原（2回の中和用量）を使用するため、反応は非常に敏感です。抗原調製物中の中和用量の数は、RNGAを使用して決定され、抗原の連続2倍希釈は、正常ウサギ血清の1％溶液で行われ、抗体赤血球診断薬がウェルに追加されます。抗原の中和用量はその最大希釈であり、感作された赤血球の完全な接着をもたらします。

反応前に、試験血清を1：5-1：10に希釈し、56℃の温度で30分間不活化します。血球凝集素を吸着させるために、製剤化または新たに洗浄したラム赤血球の50％懸濁液を、希釈血清1mlあたり0.1mlの懸濁液の割合で血清に添加します。混合物を振とうし、37℃で30分間または室温で1時間インキュベートし、その後、遠心分離によって赤血球を沈殿させる。赤血球を沈殿させるために、血清を翌日まで冷蔵庫に置いておくことができます。

実験中、試験材料は、マイクロタイターパネルのウェル内で0.025mlの容量の正常ウサギ血清の1％溶液で希釈されます。次に、0.025mlの量の2つの中和用量の抗原を各ウェルに加える。プレートを振とうし、37℃で30分間または室温で1時間放置します。次に、0.025mlの抗体赤血球診断薬をすべてのウェルに加えます。プレートを振とうし、室温で1.5〜2時間インキュベートした後、反応結果を考慮に入れます。会計は翌日にも行うことができます。研究された血清の力価は、赤血球がくっつかない最大希釈であると考えられています。

経験には、次の種類の制御が伴います。

1）感作赤血球の安定性（赤血球+正常ウサギ血清の1％溶液）;

2）各試験血清中の血球凝集素の枯渇の完全性（最小希釈の試験血清+ホルマリン化赤血球）。

3）抗原の最小中和用量を決定することの正確さ（抗原+抗体赤血球診断の中和用量の2、1および0.5）。

逆間接血球凝集（rong）は、試験材料中の細菌およびウイルス抗原を示すため、および多くの感染症の明白な診断のために使用されます。

RNHAとは対照的に、この反応では、赤血球は抗原ではなく、抗原が添加されたときに凝集が起こる抗体によって感作されます。

赤血球は、ホルマリンまたはグルタルアルデヒドで事前に固定された後、免疫血清から分離され、他の血清タンパク質から精製されたガンマグロブリンに結合します。赤血球の表面へのガンマグロブリンの結合は、塩化クロムの助けを借りて起こります。これを行うには、免疫血清から分離した1容量の免疫グロブリン、1容量の正式な赤血球の50％懸濁液、および1容量の0.1〜0.2％塩化クロム溶液を8容量の蒸留水に加えます。混合物を室温で10〜15分間放置した後、赤血球を受動的血球凝集反応のように処理します。

抗体診断の特異性は、相同抗原による受動的血球凝集の阻害の反応でチェックされます。反応は、同種の抗原によって少なくとも16倍阻害されなければならず、異種の抗原によって阻害されてはなりません。自発的な血球凝集がない場合は、コントロールを使用してください。

この反応の助けを借りて、病原体は、死んだ人や動物の臓器、たとえば脳、脾臓、肺の肝臓から採取された材料に示されます。これらの臓器の10％懸濁液を等張塩化ナトリウム溶液で調製し、10,000 rpmで30〜60分間遠心分離し、上清を抗原として使用します。

方法論。安定化溶液で試験物質（抗原）の2倍希釈液を準備します。マイクロアレイの3つの隣接するウェルに各抗原希釈液を1滴滴下します（反応には3列のウェルが平行になります）。最初の列の各ウェルに1滴の安定化溶液を加え、1：10の希釈で1滴の同種免疫血清を2列目のウェルに加え、1滴の異種免疫血清を3行目。 2行目と3行目は、反応の特異性のコントロールとして機能します。混合物を室温で20分間放置する。

感作赤血球（赤血球抗体診断）の1％懸濁液を1滴すべてのウェルに加え、プレートを完全に振とうします。反応の結果は、30〜40分後に考慮されます。特定の抗原の存在下では、血球凝集は1列目と3列目（異種血清を含む）で認められ、抗原が以前に相同血清で中和された2列目では見られません。

反応は、自発的凝集のための感作赤血球の制御を伴う。

逆間接赤血球凝集抑制反応（RTONGA）人間と動物の血清中の抗体の存在を決定することができます。

方法論。血清を等張塩化ナトリウム溶液で10倍に希釈し、65°Cの温度で20分間加熱して非特異的阻害剤を破壊し、次に血清の2倍希釈液を安定化溶液と抗原含有の作業用量で調製します。 4つの凝集ユニット。マイクロパネルのウェルに各血清希釈液を1滴加え、抗原を1滴加えます。この希釈液は、作業用量に対応します。混合物の成分を室温で20分間接触させた後、赤血球抗体診断薬1滴をすべてのウェルに加え、完全に振とうします。室温で1.5〜2時間インキュベートした後、血球凝集により反応の結果が考慮されます。血清力価はその最高希釈度であり、4つの抗原凝集ユニットによる血球凝集反応を完全に阻害します。

反応は、以下の存在下での自発的凝集のための感作赤血球の制御を伴う。a）安定化溶液。 b）正常な抗原（ウイルスを含まない材料から）。 c）試験血清。反応の利点は、その汎用性とさまざまな抗原を検出するためにそれを使用する可能性にあります。

血球凝集の結果の評価。 RNGA、RONGA、およびRTONGAの結果は、赤血球凝集の程度に応じて考慮されます。（++++）-完全凝集。（+++）-完全ではない凝集; （++）-部分凝集; （+）-凝集の痕跡; （–）–凝集反応がない。

凝集が完全（++++）またはほぼ完全（+++）であり、診断が反応の各成分の存在下で自発的な凝集を起こさず、抗原または抗体の特異性が制御されている場合、反応は陽性と見なされます。ポジティブ。

間接（受動）血球凝集（RIHA）の反応は、赤血球がその表面に吸着された場合、吸着された抗原に対する抗体と相互作用するときに凝集する能力を獲得するという事実に基づいています。 RNGAスキームを図1に示します。 34. RNHAは、多くの感染症の診断に広く使用されています。

米。 34.受動的血球凝集（RPHA）の反応のスキーム。 A-赤血球診断の取得：B-RPHA：1-赤血球：2-研究中の抗原。 3-赤血球診断; 4-研究された抗原に対する抗体：5-凝集

反応設定。試験血清を56°Cで30分間加熱し、1：10〜1：1280の比率で順次希釈し、0.25 mlの試験管またはウェルに注ぎます。次に、赤血球診断薬を2滴加えます（抗原を含む赤血球）。それらに吸着）。

コントロール：明らかに免疫血清を含む赤血球診断薬の懸濁液。正常血清による診断の中断; 試験した血清を含む正常な赤血球の懸濁液。最初のコントロールでは凝集が発生するはずですが、2番目と3番目では発生しないはずです。

RIGAの助けを借りて、既知の抗体が赤血球に吸着されている場合、未知の抗原を決定することが可能です。

血球凝集反応は、タカチマイクロタイターを使用して0.025ml（マイクロメソッド）の容量に設定することができます。

質問を制御する

1.赤血球とウイルスの存在についてテストされた材料との間の陽性RGA結果は何を示していますか？

2.ウイルスとそれに対応する血清を赤血球に加えると、赤血球の凝集が起こりますか？この現象を明らかにする反応の名前は何ですか？

エクササイズ

RIGAの結果を検討して登録します。

沈殿反応

沈殿反応では、電解質の存在下で可溶性抗原（溶解物、抽出物、ハプテン）と特定の抗体からなる特定の免疫複合体が沈殿します。

この反応の結果として形成される濁ったリングまたは沈殿物は、沈殿物と呼ばれます。この反応は、主に抗原粒子のサイズが凝集反応とは異なります。

沈殿反応は通常、多くの感染症（炭疽菌、髄膜炎など）の診断で抗原を決定するために使用されます。法医学において-血液、精子などの種を決定するため。衛生および衛生研究-製品の改ざんを確立するとき; その助けを借りて、動植物の系統発生関係を決定します。あなたが必要とする反応のために：

1.抗体（沈降素）-抗体価が高い（1：100,000以上）免疫血清。沈殿する血清の力価は、それが反応する抗原の最高希釈によって決定されます。血清は通常、希釈せずに、または1：5〜1：10に希釈して使用されます。

2.抗原-タンパク質または脂質多糖類の性質の溶解物質（完全な抗原およびハプテン）。

3.等張液。

沈殿反応を行う主な方法は、リング沈殿反応と寒天（ゲル）中での沈殿反応です。

注意！沈殿反応に関与するすべての成分は完全に透明でなければなりません。

リング沈殿反応。パスツールピペットを使用して、0.2〜0.3 ml（5〜6滴）の血清を沈殿チューブに加えます（血清がチューブの壁に落ちないようにする必要があります）。抗原を同じ量の血清に注意深く重ね、試験管の壁に沿って薄いパスツールピペットで注ぎます。試験管は傾斜した位置に保たれます。適切な層を作ることで、血清と抗原の間に明確な境界が得られるはずです。液体が混ざらないように注意して、試験管を三脚に入れてください。反応の陽性結果により、抗原と抗体の境界に濁った「リング」が形成されます-沈殿物（図48を参照）。

反応の後にいくつかのコントロールが続きます（表18）。反応成分を試験管に導入する順序は非常に重要です。血清の相対密度が高いため、血清を抗原（コントロールでは等張液上）に重ねることはできません。血清はチューブの底に沈み、液体間の境界は検出されません。。

表18

ノート。 +「リング」の存在; -「リング」の欠如。

結果は、コントロールから始めて、いつものように5〜30分後、場合によっては1時間後に記録されます。 2番目の試験管の「リング」は、免疫血清が対応する抗原と特定の反応を開始する能力を示します。 3番目から5番目の試験管には「リング」があってはなりません。互いに対応する抗体や抗原はありません。 1番目の試験管の「リング」-陽性反応結果-は、テスト抗原が採取された免疫血清に対応することを示し、「リング」（2番目の試験管にのみ「リング」）がないことは、それらの不一致-陰性を示します反応結果。

寒天（ゲル）での沈殿反応。反応の特徴は、抗原と抗体の相互作用が高密度の媒体、つまりゲルで起こることです。得られた沈殿物は、培地の厚さに濁ったバンドを与える。バンドがないことは、反応成分間の不一致を示しています。この反応は、生物医学研究、特にジフテリアの原因物質における毒素形成の研究で広く使用されています。

質問を制御する

1.凝集反応と沈殿反応の主な違いは何ですか？

2.沈殿反応に濁った成分を使用できないのはなぜですか？

エクササイズ

1.リング沈殿反応を設定し、結果を描画します。

2.寒天沈殿反応における抗原と抗体の相互作用の性質を研究し、結果を引き出します（先生からカップを入手してください）。

溶解反応（免疫細胞溶解）

免疫溶解は、補体の必須の関与を伴う抗体の影響下での細胞の溶解です。あなたが必要とする反応のために：

1.抗原-微生物、赤血球または他の細胞。

2.抗体（リジン）-免疫血清、まれに患者の血清。溶菌血清には、細菌の溶解に関与する抗体が含まれています。溶血性-赤血球の溶解に寄与する溶血素; スピロヘータの溶解には、スピロヘータが必要です。細胞-イトリジンなど。

3.補完します。モルモットの血清中のほとんどの補体。この血清（複数の動物からの混合物）は通常、補体として使用されます。新鮮な（天然の）補体は不安定で、加熱、振とう、保管によって簡単に破壊されるため、受領後2日以内に使用できます。補数を保持するために、2％が追加されます。ホウ酸および3％硫酸ナトリウム。この補体は、4℃で最大2週間保存できます。ドライコンプリメントがより一般的に使用されます。使用前に、それは元の容量（ラベルに示されている）に等張液に溶解されます。

4.等張液。

溶血反応（表19）。あなたが必要とする反応のために：

1.抗原-0.3mlの赤血球沈殿物と9.7mlの等張液の割合で洗浄したヒツジ赤血球の3％懸濁液。

2.抗体-羊の赤血球に対する溶血性血清（溶血素）。通常、製造時に調製され、凍結乾燥され、力価がラベルに示されます。

溶血素力価は、補体の存在下で赤血球の3％懸濁液の完全な溶血が起こる最高の血清希釈率です。溶血反応の場合、溶血素は3倍の力価で摂取されます。つまり、溶血素は力価の前の3分の1に希釈されます。たとえば、血清力価が1：1200の場合、血清は1：400に希釈されます（0.1mlの血清*と39.9mlの等張食塩水）。溶血素の一部は反応の他の成分に吸着される可能性があるため、過剰な溶血素が必要です。

* (0.1ml未満の血清を服用しないでください-測定精度が低下します。)

3.補体を1:10に希釈します（0.2mlの補体と1.8mlの等張食塩水）。

4.等張液。

表19.溶血反応のスキーム

結果の会計処理。最初の試験管で正しく設定された反応により、溶血が起こります-その内容は透明になります。コントロールでは、液体は曇ったままです。2番目のチューブでは、溶血の開始のために補体が欠落しています。3番目のチューブでは、溶血素がありません。4番目のチューブでは、溶血素も補体も存在しません。5番目のチューブでは、抗原が抗体と一致しない、

必要に応じて、溶血性血清を次のスキームに従って滴定します（表20）。

滴定の前に、1：100の初期血清希釈液（0.1mlの血清と9.9mlの等張食塩水）を調製し、そこから必要な希釈液を作成します。たとえば、次のようになります。

表に示すように、これらの希釈液のうち、0.5mlの血清を滴定経験の試験管に添加します。 20。

表20.溶血性血清（溶血素）の滴定スキーム

表に示されている例では。 20、溶血性血清の力価は1：1200です。

新鮮な溶血性血清を使用する場合、その補体を破壊するために不活化する必要があります。これを行うには、ウォーターバスまたはサーモスタット付きの不活性化剤で56°Cで30分間加熱します。後者の方法の方が優れています。血清の過熱、つまり変性の可能性を排除します。変性血清は検査には適していません。

溶菌反応。この反応では、適切な（相同な）血清の存在下で細菌が補完されます。反応スキームは、基本的に溶血反応スキームと同様です。違いは、2時間のインキュベーション後、すべての試験管が、実験で採取された微生物が溶解しているかどうかを調べるのに適した培地を含むペトリ皿に播種されることです。 2番目から5番目の試験管（コントロール）からの作物で正しく設定された経験により、豊富な成長があるはずです。最初の試験管（実験）からの培養物の成長の欠如または弱い成長は、微生物の死、すなわち、それらが抗体に相同であることを示します。

注意！溶菌反応は無菌状態で実施する必要があります。

質問を制御する

1.等張塩化ナトリウム溶液の代わりに蒸留水を使用すると、赤血球はどうなりますか？この現象の根底にあるものは何ですか？

2.補体がない状態で赤血球が相同免疫血清と相互作用すると、どのような反応が起こりますか？

エクササイズ

溶血反応を設定します。結果を記録して描画します。

同様の情報。

ほとんどすべての検査室診断感染症血清学的反応の方法による、病原体の抗原に対して生成される抗体の患者の血液中の検出に基づいています。彼らは19世紀の終わりから20世紀の初めにかけて医療に従事しました。

科学の発展は、微生物の抗原構造とそれらの毒素の化学式を決定するのに役立ちました。これにより、治療用の血清だけでなく診断用の血清も作成することが可能になりました。それらは、実験動物に弱毒化病原体を投与することによって得られます。数日間の曝露後、ウサギまたはマウスの血液から調製物が調製され、血清学的検査を使用して微生物またはそれらの毒素を同定するために使用されます。

そのような反応の外部症状は、その設定の状態と患者の血液中の抗原の状態に依存します。微生物粒子が不溶性の場合、それらは血清中に沈殿、溶解、結合、または固定化されます。抗原が可溶性の場合、中和または沈殿の現象が現れます。

凝集反応（RA）

血清学的凝集反応は非常に特異的です。実行は簡単で、患者の血清中の抗原の存在をすばやく判断するのに十分な視覚的です。これは、Vidal反応（腸チフスおよびパラチフス熱の診断）およびWeigl（腸チフス）を病期分類するために使用されます。

これは、ヒト抗体（または凝集素）と微生物細胞（凝集素）の間の特定の相互作用に基づいています。それらの相互作用の後、沈殿する粒子が形成されます。これは前向きな兆候です。生きているまたは殺された微生物剤、真菌、原生動物、および体細胞を使用して、反応を設定することができます。

化学的には、反応は2つの段階に分けられます。

抗体（AT）と抗原（AG）の特異的結合。
非特異的-AG-ATコングロマリットの沈殿、つまり凝集物の形成。

間接凝集反応（IPHA）

その生産には、精製されたヒツジ赤血球とヒト赤血球が使用され、抗体または抗原で前処理されます（これは、実験助手が正確に何を見つけたいかによって異なります）。場合によっては、ヒト赤血球は免疫グロブリンで治療されます。赤血球がチューブの底に定着した場合、赤血球の血清学的反応が起こったと見なされます。セルが逆さ傘の形で配置され、底全体を占めるときのポジティブな反応について話すことができます。赤血球がカラムまたは底部中央のボタンの形で定着した場合、陰性反応がカウントされます。

沈殿反応（RP）

このタイプの血清学的検査は、抗原の非常に小さな粒子を検出するために使用されます。これらは、例えば、タンパク質（またはその一部）、脂質または炭水化物とのタンパク質の化合物、細菌の一部、それらの毒素であり得る。

反応のための血清は、動物、通常はウサギの人工感染によって得られます。この方法で、あなたは絶対にどんな沈殿血清も得ることができます。血清学的沈殿反応の設定は、作用機序が凝集反応と似ています。血清に含まれる抗体は抗原と結合して大きなタンパク質分子を形成し、チューブの底または基質（ゲル）に沈着します。この方法は非常に特異的であると考えられており、ごくわずかな量の物質でも検出できます。

ペスト、野兎病、炭疽菌、髄膜炎、その他の病気の診断に使用されます。また、法医学検査にも携わっています。

ゲル中

血清学的反応は、液体培地だけでなく、寒天ゲルでも行うことができます。これを拡散沈殿法といいます。その助けを借りて、複雑な抗原混合物の組成が研究されています。この方法は、抗体に対する抗原の走化性に基づいており、その逆も同様です。ゲル内では、それらは異なる速度で互いに向かって移動し、合流して沈殿線を形成します。各行はAG-ATの1セットです。

外毒素と抗毒素（RN）の中和反応

抗毒素血清は、微生物によって生成される外毒素の作用を中和することができます。これらの血清学的反応はこれに基づいています。微生物学はこの方法を使用して、血清、毒素、およびトキソイドを滴定し、それらの治療活性を決定します。毒素中和の力は、従来の単位であるAEによって決定されます。

さらに、この反応のおかげで、外毒素の種類や種類を特定することができます。これは、ジフテリア、ボツリヌス中毒に使用されます。研究は「ガラス上」とゲル内の両方で実施できます。

溶解反応（RL）

患者の体内に入る免疫血清は、受動免疫の主な機能に加えて、溶解特性も持っています。患者の体内に侵入する微生物剤、細胞の異物、ウイルスを溶解することができます。血清に含まれる抗体の特異性に応じて、溶菌素、細胞溶解素、スピロケトリジン、溶血素などが分離されます。

これらの特異的抗体は「補体」と呼ばれます。それはほとんどすべての人体液に見られ、複雑なタンパク質構造を持ち、温度上昇、揺れ、酸、直射日光に非常に敏感です。しかし、乾燥状態では、最大6か月間溶解特性を維持することができます。

このタイプの血清学的反応には、次のようなタイプがあります。

溶菌;

溶血。

溶菌は、患者の血清と生きた微生物を含む特定の免疫血清を使用して実行されます。血液中に十分な補体が存在する場合、研究者は細菌が溶解するのを確認し、反応は陽性と見なされます。

血液の2番目の血清学的反応は、患者の赤血球の懸濁液が、特定の補体の存在下でのみ活性化される溶血素を含む血清で処理されることです。ある場合は、検査助手が赤血球の溶解を観察します。この反応はで広く使用されています現代医学血清中の補体の力価（つまり、赤血球の溶解を引き起こす最小量）を決定し、補体結合の分析を実行します。このようにして梅毒の血清学的反応が起こります-

補体結合反応（CFR）

この反応は、患者の血清中の感染性病原体に対する抗体を検出するため、およびその抗原構造によって病原体を特定するために使用されます。

ここまで、簡単な血清学的反応について説明してきました。 RSKは、2つではなく、抗体、抗原、補体の3つの要素が相互作用するため、複雑な反応と見なされます。その本質は、抗体と抗原の間の相互作用が、形成されたAG-AT複合体の表面に吸着される補体タンパク質の存在下でのみ起こるという事実にあります。

抗原自体は、補体の添加後、反応の質を示す重要な変化を受けます。それは、溶解、溶血、固定化、殺菌または静菌作用である可能性があります。

反応自体は2つのフェーズで発生します。

検査官には視覚的に見えない抗原-抗体複合体の形成。
補体の作用による抗原の変化。このフェーズは、ほとんどの場合、肉眼で追跡できます。反応が視覚的に見えない場合は、追加のインジケーターシステムを使用して変化を識別します。

インジケーターシステム

この反応は補体結合に基づいています。 RSCが設定されてから1時間後に、精製されたラム赤血球と補体を含まない溶血性血清が試験管に加えられます。未結合の補体が試験管に残っている場合、それは羊の血球と溶血素の間に形成されたAG-AT複合体に結合し、それらを溶解させます。これは、RSKが負であることを意味します。したがって、赤血球が無傷のままである場合、反応は陽性です。

血球凝集反応（RHA）

2つの根本的に異なる血球凝集反応があります。それらの1つは血清学的であり、血液型を決定するために使用されます。この場合、赤血球は抗体と相互作用します。

また、赤血球はウイルスによって生成された血球凝集素と反応するため、2番目の反応は血清学的には適用されません。各病原体は特定の赤血球（鶏、羊、猿）にのみ作用するため、この反応は非常に特異的であると見なすことができます。

チューブの底にある血球の位置によって、反応が陽性か陰性かがわかります。それらのパターンが逆さの傘に似ている場合、目的のウイルスが患者の血液中に存在します。そして、すべての赤血球がコインカラムのように形成されている場合、望ましい病原体はありません。

血球凝集抑制反応（HITA）

これは非常に特異的な反応であり、ウイルスの種類、種類、または患者の血清中の特異的抗体の存在を確認することができます。

その本質は、試験管に試験材料とともに添加された抗体が赤血球への抗原の沈着を防ぎ、それによって血球凝集を止めるという事実にあります。これは、目的の特定のウイルスに対する特定の抗原が血中に存在することの定性的な兆候です。

免疫蛍光反応（RIF）

この反応は、蛍光色素で処理した後のAG-AT複合体を検出する能力に基づいています。この方法は取り扱いが簡単で、純粋な培養物を分離する必要がなく、時間もかかりません。感染症の迅速な診断には欠かせません。

実際には、これらの血清学的反応は、直接と間接の2つのタイプに分けられます。

ダイレクトRIFは、蛍光血清で前処理された抗原で作られています。そして間接的に、薬剤は最初に目的の抗体の抗原を含む従来の診断薬で処理され、次にAG-AT複合体のタンパク質に特異的な発光血清が再適用され、微生物細胞が顕微鏡下で見えるようになります。

レッスン14

トピック：間接的な血清学的反応。間接赤血球凝集反応（RNHA）、補体結合反応（RSK）。

抗体

抗体は、抗原に特異的に結合できるタンパク質分子です。抗体はガンマグロブリンです。抗体の別名は免疫グロブリンです。哺乳類には、構造といくつかの特性が異なる5つのクラスの免疫グロブリンがあります：IgG、IgM、IgA、IgE、IgD。

免疫グロブリンの構造。 IgGは最も「典型的な」構造を持っています。この分子は4つのタンパク質鎖で構成されています。2つは軽い（L）、2つは重い（H）で、これらはジスルフィド結合で相互接続されています。抗原に結合する抗体の部位は、抗体の活性部位と呼ばれます。 IgG分子には2つの活性中心があります。これは、重鎖と軽鎖のN末端部分によって形成されます。ジスルフィド結合の近くに位置する重鎖の領域は、ヒンジ領域と呼ばれます。パパイン酵素の助けを借りて、ヒンジ領域の上のIgG分子は3つのフラグメントに分割されます。そのうちの2つには、軽鎖と重鎖の一部（Fabフラグメント）が含まれています。 3番目のフラグメントは重鎖の一部のみで構成されています（Fcフラグメント）。可動ヒンジ領域のおかげで、Fabフラグメントは空間内の相対位置を変更できます。

軽鎖と重鎖のアミノ酸配列は、定常（一定）領域と可変領域に分けられます。可変領域は、軽鎖および重鎖（VLおよびVH）のN末端に見られます。定常領域は鎖（CLおよびCH）のC末端にあります。軽鎖および重鎖では、アミノ酸配列はドメインと呼ばれるいくつかの球状構造を形成します。

抗体の活性部位は、軽鎖と重鎖の可変ドメインによって形成され、空洞です（ パラトープ）、その表面に電荷の特定の構成と分布を持っています。活性部位の電荷のサイズ、形状、および分布によって、その特異性、つまり特定の抗原決定基に結合する能力が決まります（ エピトープ）、これは補完的な構造を持っています。

抗原決定基は、抗原分子の表面に突き出た領域です。したがって、エピトープとパラトープの相互作用は、「キーロック」の原則に従って発生します。

抗体の活性中心と抗原決定基との間の接続の強さは、親和性の概念によって特徴付けられます。 親和性活性部位と抗原決定基の親和性の尺度です。

IgGクラスの免疫グロブリンは血清免疫グロブリンの総量の75％を占めています。 IgGの重要な特性は、胎盤を通過する能力です。したがって、母体の抗体は子供の体に入り、生後数ヶ月の感染から子供を保護します（自然の受動免疫）。

免疫グロブリンの総プールの約10％はIgMクラスに属しています。 IgM分子は五量体です。つまり、IgG分子と構造が似ている5つの同一の分子で構成され、10個の活性中心があります。サブユニットは、ジスルフィド結合によって結合されています。 IgM分子には、サブユニットに結合する追加のJ鎖があります。 IgMクラスの抗体は胎盤関門を通過しません。

IgAクラスの抗体は、免疫グロブリンの総含有量の15〜20％を占めています。 IgA分子は2つの軽鎖と2つの重鎖で構成され、2つの活性中心を持っています。血清では、IgAは単量体の形で存在しますが、粘膜の分泌物では、IgAは二量体の形で提示され、分泌型またはsIgAと呼ばれ、4つの活性中心を持っています。 sIgA分子の重鎖のC末端は、J鎖と分泌成分と呼ばれるタンパク質分子によって相互接続されています。分泌成分は、sIgAをタンパク質分解酵素による切断から保護します。大量に粘膜から分泌されます。 sIgAの主な機能は、粘膜を感染から保護することです。 IgAは胎盤関門を通過しません。高濃度のsIgAは、特に授乳の最初の日に、女性の母乳に見られます。彼らは保護します消化管感染から生まれたばかり。

IgDは主にBリンパ球の膜に見られます。それらはIgG、2つの活性中心に似た構造を持っています。生物学的役割は完全にはわかっていません。

IgE-血清中のこのクラスの免疫グロブリンの濃度は非常に低いです。 IgE分子は、主にマスト細胞と好塩基球の表面に固定されています。その構造において、IgEはIgGに似ており、2つの活性中心を持っています。 IgEは駆虫性免疫の発達に不可欠であると考えられています。 IgEは、いくつかのアレルギー性疾患（気管支喘息、干し草熱）およびアナフィラキシーショックの病因において主要な役割を果たします。

間接赤血球凝集反応

間接的な血清学的反応では、抗原と抗体の複合体は肉眼では見えません。このような場合、抗原はより大きな担体粒子（赤血球、ラテックス粒子）に吸着され、抗原性赤血球診断を取得します。その後、そのような粒子を特定の抗体で凝集させると、凝集物（沈殿物）を肉眼で見ることができます。間接（受動）血球凝集（RIHA）の反応は、抗原が吸着した赤血球である抗原性赤血球診断を使用して血清抗体を検出します。

抗原が吸着した赤血球は、対応する血清抗体と相互作用し、赤血球がくっついて、スカラップ状の沈殿物の形でチューブまたは細胞の底に落下します。否定的な反応で、赤血球はボタンの形で落ち着きます。

RNHAは、プラスチック製の錠剤または血清希釈液の入った試験管に入れられ、赤血球診断薬が追加されます。

時々、抗体赤血球診断が使用されます-抗体が吸着される赤血球。この反応はRONGAと呼ばれます-逆間接血球凝集の反応。

RNGAコンポーネント：

患者の血液の血清（希釈率1:25）;

赤血球診断（研究対象の病原体の抗原がロードされた赤血球）;

溶液を洗浄します。

RNGAステージング。免疫学的研究のために、2滴のリン酸緩衝液をプレートの7つのウェルに加えます。患者の血清2滴を最初のウェルに加え、その後2滴を最初のウェルから2番目のウェルに、2番目から3番目などに移します。2滴を6番目のウェルから取り除きます。 7つのウェルすべて（実験用6つと対照1つ）に、赤血球診断薬を2滴加えます。各操作の後、洗浄液でピペットをすすぐ必要があります。プレートを室温で45分間放置した後、結果を考慮に入れます。

補体結合反応

補体結合反応は、抗原が抗体と結合すると免疫複合体が形成され、抗体のFcフラグメントを介して補体が結合するという事実にあります。抗原抗体複合体が形成されていない場合、補体は遊離したままです。遊離補体は、混合物に、ラム赤血球とそれらに対する抗体からなる溶血系を加えることによって検出されます。陽性反応は、抗原+抗体複合体への補体結合の結果として溶血がないことです。陰性反応は、赤血球+抗赤血球抗体複合体への補体結合の結果としての溶血の存在です。

RSKコンポーネント：

健康な血清;

患者の血液の血清（1：5に希釈）;

反応の抗原性成分は不活化病原体です。

作業用量に対応する希釈で補完します。補体はモルモットの血清から得られます。補体力価はその最小用量であり、溶血性血清の存在下で赤血球の完全な溶血を引き起こします。 CSCの設定で使用される補体の作業用量は、その力価より30％多くなります。

溶血系-ラム赤血球に対するウサギ抗体で処理されたラム赤血球の懸濁液。

洗浄液。

RSK設定。 RSKは2つの試験管に入れました-実験と対照。患者の血清0.5mlを試験管に加え、健康なドナーの血清0.5mlを対照管に加え、病原体溶解物0.5mlおよび補体0.5mlを両方の管に加える。各操作の後、洗浄液でピペットをすすぐ必要があります。チューブを37℃の温度のサーモスタットに30分間入れます。インキュベーション後、1.0mlの溶血システムを両方の試験管に加えます。チューブを振とうし、37℃のサーモスタットに30分間入れます。試験管内で陽性反応を示すと、溶血が遅延し（無色の液体と赤血球の沈殿物）、対照管内で溶血します-赤血球の溶血。

レッスンの準備をするための文献：

1. Borisov微生物学、ウイルス学、免疫学。 M.、2002年。

2.医療微生物学、ウイルス学および免疫学。エド。。 M.、2004年。

3.ポズディーブ微生物学。 M.、GEOTAR-MEDIA、2005年。

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血清学的反応は、異なる特性を持つ成分の相互作用中の抗原-抗体複合体の形成に伴う現象に従って指定されます。凝集、沈殿、溶解の反応があります。

凝集反応（RA）

凝集反応（RA）は、特定の抗体と相互作用する小体抗原（細菌、感作赤血球、ラテックス粒子などの懸濁液）の使用に基づいており、その結果、結果として生じる抗原-抗体複合体が沈殿します。この反応は、実験室で広く使用されています。血清学的診断細菌感染症および分離された微生物の同定のため。

RAは、ブルセラ症（ライト、ヘドルソン反応）、野兎病、レプトスピラ症（RAL-レプトスピラ凝集および溶解反応）、リステリア症、typhus（RAP-リケッチア凝集反応）、赤痢、エルシニア症、偽結核などの多くの感染症の診断に使用されます。

間接的または受動的な凝集反応（RIGAまたはRPGA）。

この反応を設定するために、抗体または抗原で感作された動物（羊、サル、モルモット、一部の鳥）の赤血球が使用されます。これは、赤血球の懸濁液と抗原または免疫血清の溶液のインキュベーションによって達成されます。

抗原で感作された赤血球に基づいて得られた診断は、 抗原性赤血球診断。それらは、赤血球シゲロシス診断、赤血球サルモネラO診断などの血清の段階希釈で抗体を検出するように設計されています。

したがって、特定の免疫グロブリンで感作された赤血球に基づく診断は、抗体（免疫グロブリン）診断また、さまざまな材料の抗原を検出するのに役立ちます。たとえば、RIGAの赤血球免疫グロブリンジフテリア診断薬は、鼻や中咽頭からの材料を接種したときに、液体栄養培地中のコリネバクテリアのジフテリア外毒素を検出するために使用されます。

血球凝集反応は、細菌感染症（腸チフス、腸チフス、腸チフス、ブルセロシス、ペスト、コレラなど）とウイルス感染症（インフルエンザ、アデノウイルス感染症、はしかなど）の両方を診断するために使用されます。 RIGAはRAよりも感度と特異性に優れています。

血球凝集抑制反応（HITA）

血球凝集抑制試験（HITA）は、血清中の抗ウイルス抗体を滴定するため、および分離されたウイルス培養のタイプを確立するために使用されます。 RTGAを使用してそれらを診断できますウイルス感染、その原因物質は血球凝集特性を持っています。

この方法の原理は、特定の種類のウイルスに対する抗体を含む血清がその血球凝集活性を抑制し、赤血球が非凝集のままであるということです。

受動的血球凝集（RTPGA）の阻害（遅延）の反応。

RTGAには、免疫血清、抗原（試験物質）、感作赤血球の3つの成分が関与しています。

試験物質に免疫標準血清の抗体と特異的に反応する抗原が含まれている場合、それはそれらに結合し、続いて血清に相同な抗原で感作された赤血球を添加すると、血球凝集は起こりません。

RTPHAは、微生物抗原を検出し、それらを定量化し、TPHAの特異性を制御するために使用されます。

ラテックス凝集反応（RLA）

ラテックス粒子は、抗体（免疫グロブリン）の担体として使用されます。 RLAは、感染症を診断するための明確な方法であり、所要時間（最大10分）と少量の試験物質中の抗原を検出する能力を考慮に入れています。

RLAは、肺炎連鎖球菌、インフルエンザ菌b型、脳脊髄液中の髄膜炎菌の抗原を示し、喉の綿棒でA群連鎖球菌を検出し、サルモネラ症、エルシニア症、その他の疾患を診断するために使用されます。このメソッドの感度は、1〜10 ng / ml、または1 µl中の10³-10⁶細菌細胞です。

凝集反応（RKoA）

凝集反応（RKoA）は、ブドウ球菌のプロテインAが特定の免疫グロブリンを付着させる能力に基づいています。エクスプレス診断の方法であるRKAは、ヒトの秘密および循環免疫複合体（CIC）の組成に含まれる可溶性耐熱性抗原を特定するのに役立ちます。 CECの組成中の特定の抗原を検出するには、血清からの予備的な沈殿が必要です。

沈殿反応

沈殿反応（RP）では、抗体と高度に分散した可溶性抗原（タンパク質、多糖類）との相互作用の結果として、補体沈殿物が関与して複合体が形成されます。これは、さまざまな抗原や抗体を検出して特徴づけるために使用される高感度のテストです。高品質のRPの最も簡単な例は、免疫血清上の抗原層の境界にある試験管内の不透明な沈殿バンドの形成です。これはリング沈殿反応です。半液体寒天またはアガロースゲルでは、さまざまな種類のRPが広く使用されています（二重免疫拡散法、放射状免疫拡散法、免疫電気泳動）。

補体結合反応（CFR）

補体結合反応（CFR）は、補体が関与する溶血の現象に基づいています。補体結合抗体のみを検出できます。

RSCは、多くの細菌およびウイルス感染症、リケッチア症、クラミジア、伝染性単核球症、原虫感染症、および蠕虫病の診断に広く使用されています。 RSKは複雑な血清学的反応であり、抗原抗体と補体系で表される検査（血清）と溶血性（羊赤血球+溶血性血清）の2つのシステムが関与します。溶血性血清は、ラム赤血球で免疫されたウサギの熱不活化血清です。羊の赤血球に対する抗体が含まれています。

試験血清に抗原と相同な抗体が含まれている場合、RSKの陽性結果（溶血がないこと）が観察されます。この場合、結果として生じる抗原-抗体複合体は補体に結合し、遊離補体がない場合、溶血系の追加は溶血を伴わない。血清中に抗原に対応する抗体がない場合、抗原-抗体複合体の形成は起こらず、補体は遊離したままであり、血清は赤血球の溶血を引き起こします。溶血の存在は、反応の否定的な結果です。

Yushchuk N.D.、Vengerov Yu.Ya.