يتم إجراء التفاعل للكشف عن مستضدات مسببات الأمراض في مادة الاختبار عن طريق إضافة مصل مناعي إليها. في وجود مستضد متماثل ، يحدث ارتباط بالأجسام المضادة ، وبالتالي ، بعد إضافة كريات الدم الحمراء المحسّسة للمستضد ، لا يحدث تراصها ، والذي يتم تقييمه كنتيجة إيجابية. لمزيد من الحساسية للتفاعل ، يضاف مصل مناعي محدد إلى مادة الاختبار بكمية دنيا (وحدتان من التراص الدموي). يتم تحديد عيار المصل المناعي مسبقًا باستخدام RNGA. بالنسبة لوحدة تراص دم واحدة ، يؤخذ التخفيف المحدود للمصل ، الذي يسبب التصاق كريات الدم الحمراء.

المنهجية. في آبار ألواح البوليسترين أو أنابيب التراص أضف 0.025 مل من محلول 1٪ من مصل الأرانب العادي وقم بعمل تخفيفات متسلسلة مرتين من مادة الاختبار. ثم يضاف 0.025 مل من المصل المناعي إلى جميع الآبار ، ويتم رج الطبق ويترك لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية أو لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، يضاف 0.025 مل من تشخيص المستضد إلى جميع الآبار ، ويتم رجها وتركها لمدة ساعتين ، وبعد ذلك يتم أخذ النتائج في الاعتبار.

عند تنفيذ هذا التفاعل ، تتم إضافة التحكم في خصوصية المصل المناعي إلى عنصر التحكم لـ RNGA ، والذي يتكون من مستضد معين ، ومصل مناعي (2 ، 1 ، 0.5 وحدة تخص الدم) وتعليق كريات الدم الحمراء المحسّنة.

يستخدم RTNGA أيضًا للكشف عن أجسام مضادة محددة (كاملة ومعيقة) ، والتي تضاف إليها كمية جرعات من المستضد إلى مصل الاختبار. إذا كان يحتوي على أجسام مضادة ، فعندئذٍ يرتبط المستضد الخاص بهم ، وبالتالي ، بعد إضافة كريات الدم الحمراء المحسّسة بالأجسام المضادة (المرحلة الثانية من RTNGA) ، لا تلتصق كريات الدم الحمراء ببعضها البعض.

بسبب استخدام الحد الأدنى من المستضد (جرعتان معادلة) ، يكون التفاعل شديد الحساسية. يتم تحديد عدد جرعات المعادلة في المستحضر المستضدي باستخدام RNGA ، بينما يتم إجراء التخفيفات التسلسلية ثنائية الطية للمستضد في محلول 1٪ من مصل الأرانب الطبيعي ويتم إدخال جسم مضاد لتشخيص كريات الدم الحمراء في الآبار. تعتبر جرعة المعادلة من المستضد هي التخفيف الأقصى ، والذي يعطي التصاقًا كاملاً لكريات الدم الحمراء المحسّسة.

قبل التفاعل ، يتم تخفيف الأمصال المختبرة بنسبة 1: 5-1: 10 وتعطيلها عند درجة حرارة 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. لامتصاص الهيماجلوتينين ، يضاف 50٪ معلق من الكريات الحمر فورمالين أو طازجة مغسولة من الكبش إلى المصل بمعدل 0.1 مل من المعلق لكل 1 مل من المصل المخفف. يتم رج الخليط وحضنه لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية أو ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة ، وبعد ذلك يتم ترسيب كريات الدم الحمراء بالطرد المركزي. من الممكن ترك المصل في الثلاجة لترسيب كريات الدم الحمراء حتى اليوم التالي.

أثناء التجربة ، تم تخفيف مادة الاختبار في محلول 1٪ من مصل الأرانب الطبيعي بحجم 0.025 مل في آبار لوحة ميكروتيتر. ثم يتم إضافة جرعتين معادلتين من المستضد بحجم 0.025 مل لكل بئر. تُهتز الألواح وتترك لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية أو لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة. ثم يضاف 0.025 مل من الجسم المضاد لتشخيص كريات الدم الحمراء إلى جميع الآبار. يتم رج الأطباق وتحضينها لمدة 1.5 - 2 ساعة عند درجة حرارة الغرفة ، وبعد ذلك يتم أخذ نتائج التفاعل في الاعتبار. يمكن أيضًا إجراء المحاسبة في اليوم التالي. يعتبر عيار مصل الاختبار هو التخفيف الأقصى ، حيث لا يوجد التصاق كريات الدم الحمراء.

الخبرة مصحوبة بأنواع التحكم التالية:

1) استقرار كريات الدم الحمراء الحساسة (كريات الدم الحمراء + محلول 1 ٪ من مصل الأرانب الطبيعي) ؛

2) اكتمال استنفاد الهيماجلوتينين في كل مصل اختبار (مصل اختبار في أقل تخفيف + كريات الدم الحمراء الرسمية) ؛

3) صحة تحديد الحد الأدنى من جرعة التحييد من المستضد (2 ، 1 و 0.5 جرعات معادلة للمستضد + تشخيص كريات الدم الحمراء للأجسام المضادة).

رد فعل ردود الفعل التراص الدموي غير المباشريستخدم (رونجا) للإشارة إلى المستضدات البكتيرية والفيروسية في مواد الاختبار ، وكذلك للتشخيص السريع لعدد من العدوى.

على عكس RNGA ، في هذا التفاعل ، لا يتم تحسس كريات الدم الحمراء باستخدام مستضد ، ولكن مع الأجسام المضادة ، التي يحدث تراصها عند إضافة المستضد.

يتم تثبيت كريات الدم الحمراء مبدئيًا بالفورمالين أو الجلوتارالدهيد ، ثم يتم ربطها بغاما جلوبيولين المعزول من مصل المناعة وتنقيته من بروتينات المصل الأخرى. يحدث ارتباط جاما الجلوبيولين بسطح كريات الدم الحمراء بمساعدة كلوريد الكروم. لهذا الغرض ، تمت إضافة حجم واحد من الغلوبولين المناعي المعزول من مصل المناعة ، وحجم واحد من 50٪ معلق من كريات الدم الحمراء ، وحجم واحد من 0.1-0.2٪ من محلول كلوريد الكروم إلى 8 أحجام من الماء المقطر. يُترك الخليط لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، ثم يتم التعامل مع كريات الدم الحمراء في تفاعل التراص الدموي السلبي.

يتم التحقق من خصوصية تشخيص الجسم المضاد في تفاعل تثبيط التراص الدموي السلبي بواسطة مستضد متماثل. يجب أن يثبط التفاعل بواسطة مستضد متماثل 16 مرة على الأقل ولا يثبطه مستضد مغاير. يتم استخدام السيطرة على عدم وجود التراص الدموي العفوي.

بمساعدة هذا التفاعل ، يتم إجراء مؤشر على مسببات الأمراض في المواد المأخوذة من أعضاء الموتى والحيوانات ، على سبيل المثال ، من الدماغ والطحال وكبد الرئتين. تحضير 10٪ معلق من هذه الأعضاء في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، الطرد المركزي لهم لمدة 30-60 دقيقة عند 10000 دورة في الدقيقة واستخدام طاف كمستضد.

المنهجية.قم بإعداد تخفيفين من مادة الاختبار (مستضد) في محلول استقرار. أضف قطرة واحدة من كل تخفيف للمستضد في 3 آبار مجاورة من اللوحة الدقيقة (يستغرق التفاعل 3 صفوف متوازية من الآبار). أضف قطرة واحدة من محلول التثبيت إلى كل بئر من الصف الأول ، وقطرة واحدة من مصل المناعة المتماثل بتخفيف بنسبة 1: 10 إلى آبار الصف الثاني ، وقطرة واحدة من مصل المناعة غير المتجانسة في الصف الثالث. يعمل الصفان الثاني والثالث كعناصر تحكم لخصوصية الاستجابة. يترك الخليط لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

إلى جميع الآبار ، أضف قطرة واحدة من 1٪ معلق من كريات الدم الحمراء المحسّسة (تشخيص الجسم المضاد لكريات الدم الحمراء) ورج الصفائح جيدًا. تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار بعد 30-40 دقيقة. في وجود مستضد معين ، لوحظ التراص الدموي في الصف الأول والثالث (مع مصل غير متجانس) وغائب في الصف الثاني ، حيث يتم تحييد المستضد مسبقًا بمصل متماثل.

ويصاحب التفاعل التحكم في كريات الدم الحمراء المحسّسة من أجل التراص التلقائي.

تفاعل تثبيط التراص الدموي العكسي غير المباشر (RTONGA)يسمح لك بتحديد وجود الأجسام المضادة في أمصال البشر والحيوانات.

المنهجية. يتم تخفيف الأمصال 10 مرات بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، وتسخينها لمدة 20 دقيقة عند 65 درجة مئوية لتدمير مثبطات غير محددة ، ثم يتم تحضير تخفيفات الأمصال مرتين في محلول استقرار وجرعة عمل من مستضد تحتوي على 4 وحدات تراص. أضف قطرة واحدة من كل تخفيف مصل إلى الآبار الدقيقة وأضف قطرة واحدة من المستضد إليها ، بحيث يتوافق التخفيف مع جرعة العمل. بعد ملامسة مكونات الخليط لمدة 20 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة ، يتم إضافة قطرة واحدة من تشخيص الجسم المضاد لكريات الدم الحمراء إلى جميع الآبار ورجها جيدًا. بعد 1.5-2 ساعة من الحضانة في درجة حرارة الغرفة ، تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار عن طريق التراص الدموي. يعتبر عيار المصل هو أكبر تخفيف له ، والذي يثبط تمامًا تفاعل التراص الدموي بأربع وحدات مستضد تراص.

يكون التفاعل مصحوبًا بالتحكم في كريات الدم الحمراء المحسّسة من أجل التراص التلقائي في وجود: أ) محلول استقرار ؛ ب) مستضد طبيعي (من مادة لا تحتوي على فيروس) ؛ ج) مصل الاختبار. تكمن ميزة التفاعل في تنوعه وإمكانية استخدامه للكشف عن المستضدات المختلفة.

تقييم نتائج التراص الدموي. تؤخذ نتائج RNGA و RONGA و RTONGA في الاعتبار وفقًا لدرجة تراص كريات الدم الحمراء: (++++) - تراص كامل ؛ (+++) - تراص أقل اكتمالا ؛ (++) - تراص جزئي ؛ (+) - آثار تراص ؛ (-) - لا تراص.

يعتبر التفاعل إيجابيًا إذا اكتمل التراص (++++) أو شبه كامل (+++) ، ولا يعطي التشخيص تراصًا تلقائيًا في وجود كل مكون من مكونات التفاعل ، والتحكم في خصوصية المادة المستضد أو الجسم المضاد إيجابي.

يكون تفاعل التراص الدموي غير المباشر أو السلبي (RNGA أو RPHA) أكثر حساسية وتحديدًا من تفاعل التراص. يتم استخدام هذا التفاعل أيضًا بطريقتين.

1) للكشف عن الأجسام المضادة في مصل دم المريض ، يتم استخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء ، حيث يتم امتصاص المستضد على سطح كريات الدم الحمراء المعالجة بالتانين. فيما يتعلق بهذا التفاعل ، غالبًا ما يستخدم مصطلح RPHA.

يتم تخفيف مصل الاختبار في آبار الألواح البلاستيكية ويتم إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء. مع رد فعل إيجابي ، يظهر غشاء رقيق على طول جدران الحفرة على شكل "مظلة من الدانتيل" ، مع رد فعل سلبي - رواسب كثيفة من كريات الدم الحمراء على شكل "زر".

2) للكشف عن السموم و المستضدات البكتيريةفي مادة الاختبار ، يتم استخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء بالأجسام المضادة ، والتي يتم الحصول عليها عن طريق امتصاص الأجسام المضادة على كريات الدم الحمراء. فيما يتعلق برد الفعل هذا ، غالبًا ما يستخدم مصطلح RNGA. على سبيل المثال ، يتم الكشف عن مستضد عصية الطاعون ، والدفتيريا ، والذيفان الخارجي للبوتولينوم بمساعدة تشخيص الأجسام المضادة.

رد فعل كومبس (اختبار aptiglobulin)

يتم استخدام التفاعل لاكتشاف الأجسام المضادة غير الكاملة ، على سبيل المثال ، الأجسام المضادة لعامل Rh. إلى Rh + كرات الدم الحمراء أضف مصل الاختبار ، حيث يُفترض وجود أجسام مضادة غير كاملة لعامل Rh. بعد التعلق بكريات الدم الحمراء ، لا تسبب الأجسام المضادة غير المكتملة تراصًا ، نظرًا لأن لديها مركزًا نشطًا واحدًا فقط. ثم أضف مصل مضاد الجلوبيولين الذي يحتوي على أجسام مضادة إلى الجلوبيولين البشري. عندما يقترن بأجسام مضادة غير مكتملة ، يسبب مصل مضاد الغلوبولين تراص كريات الدم الحمراء.

معادلة الترسيب

جوهر التفاعل هو ترسيب (ترسيب) مولد الضد تحت تأثير أجسام مضادة محددة. وجود المنحل بالكهرباء ضروري للحصول على تفاعل مرئي. المستضد في تفاعل الترسيب عبارة عن مواد مشتتة جزيئيًا.

رد فعل حلقة هطول الأمطارتوضع في أنابيب الترسيب الضيقة. يُسكب مصل المناعة في أنبوب اختبار ، ويتم وضع مادة الاختبار عليه بعناية. في وجود مستضد فيه ، تتشكل حلقة مترسبة معتمة عند حدود سائلين.

يستخدم التفاعل في الطب الشرعي لتحديد أنواع البروتينات الموجودة فيها بقع الدم، في السائل المنوي ، وما إلى ذلك ؛ لتحديد المستضد في تشخيص الجمرة الخبيثة (تفاعل أسكولي) والتهاب السحايا والالتهابات الأخرى ؛ في البحوث الصحية والصحية - لإثبات التزوير منتجات الطعام... يتم الحصول على الأمصال المترسبة للمناعة عن طريق تحصين الحيوانات بمستضد مناسب. على سبيل المثال ، يتم الحصول على مصل ترسيب البروتين البشري عن طريق تحصين أرنب بالبروتين البشري. عيار مصل الترسيب هو أكبر تخفيف للمستضد الذي يتفاعل معه. يستخدم المصل عادة غير مخفف أو بتخفيف 1: 5.

تفاعل ترسيب هلام أجارنفذت بعدة طرق. هذا هو تفاعل الانتشار المناعي المزدوج ، تفاعل الانتشار المناعي الشعاعي ، تفاعل الرحلان المناعي.

تفاعل مزدوج الانتشار(حسب Ouchterloni). يُسكب جل الأجار المذاب في طبق بتري ، وبعد التصلب ، يتم قطع الآبار فيه. يتم وضع المستضد في بعض الآبار ، وفي البعض الآخر - الأمصال المناعية ، التي تنتشر في الأجار ، تشكل راسبًا على شكل خطوط بيضاء عند نقطة الالتقاء.

رد فعل الانتشار المناعي الشعاعي(بحسب مانشيني). يضاف المصل المناعي إلى هلام الأجار المذاب ، ويصب في طبق. بعد تصلب الآجار ، يتم قطع الآبار فيه وتوضع المستضدات فيها ، والتي تنتشر في الأجار وتشكل مناطق ترسيب حلقي حول الآبار. كلما زاد تركيز المستضد ، زاد قطر الحلقة. يتم استخدام التفاعل ، على سبيل المثال ، لتحديد فئات مختلفة من الغلوبولين المناعي في الدم. تعمل الغلوبولين المناعي لفئات IgG و IgM و IgA في هذا التفاعل كمستضدات ، ويتم احتواء الأجسام المضادة ضدها في أمصال أحادية المستقبل محددة.

الرحلان المناعي.يتم إجراء الفصل الكهربائي لمستضدات البروتين في هلام أجار. في الأخدود ، الذي يسير بالتوازي مع اتجاه حركة البروتينات ، يتم إدخال مصل الترسيب. تنتشر المستضدات والأجسام المضادة في الأجار ، وتتشكل خطوط الترسيب عند نقطة الالتقاء.

تفاعلات تحلل المناعة

المستضد (كريات الدم الحمراء أو البكتيريا) ، بالاقتران مع أجسام مضادة محددة ، يشكل مركبًا مناعيًا ، يرتبط به المكمل (C1) ، ويتم تنشيطه بالطريقة الكلاسيكية. خلايا الدم الحمراء التكميلية المنشطة (انحلال الدم) أو البكتيريا (تحلل الجراثيم). يتم استخدام تفاعل تحلل الجراثيم لتحديد ضمة الكوليرا.

تفاعل انحلال الدم.المستضد في التفاعل هو كريات الدم الحمراء ، والأجسام المضادة (الهيموليزين) موجودة في مصل الدم الانحلالي. يرتبط الهيموليزين بخلايا الدم الحمراء ، ويتم تنشيط المكمل ، الذي يزيل خلايا الدم الحمراء. يتحول تعليق كريات الدم الحمراء المعكر إلى سائل أحمر لامع شفاف - "دم ورنيش". نظرًا لأن تفاعل انحلال الدم يحدث فقط في وجود مكمل ، يتم استخدامه كمؤشر للكشف عن المكمل.

تفاعل انحلال الدم الموضعي في مادة هلامية(تفاعل إرني) - نوع من تفاعل انحلال الدم. يعمل على تحديد عدد الخلايا المنتجة للأجسام المضادة (AOC) في الغدد الليمفاوية والطحال.

يتم خلط هلام الأجار الذائب مع تعليق خلايا الطحال وكريات الدم الحمراء ، وبعد ضبط الآجار ، تتم إضافة المكمل. يتم تشكيل منطقة انحلال الدم حول كل خلية منتجة للهيموليسين. يتم استخدام عدد هذه المناطق لتحديد عدد الخلايا المنتجة للهيموليزين.

جدول المحتويات "مناعة. تشخيص مناعي أمراض معدية.":

تفاعل التراص الموسع (RA). لتحديد AT في مصل دم المريض ، ضع تفاعل التراص الممتد (RA)... لهذا الغرض ، يضاف التشخيص إلى سلسلة من تخفيفات مصل الدم - تعليق من الكائنات الحية الدقيقة أو الجزيئات المقتولة مع Ag الممتز. أقصى قدر من التخفيف يعطي التلصيق Ag يسمى عيار المصل.

أنواع مختلفة من تفاعل التراص (RA) للكشف عن AT - اختبار قطرة الدم لمرض التولاريميا (مع تطبيق التشخيص على قطرة من الدم وظهور تراص أبيض مرئي) ورد فعل Haddleson لمرض البروسيلا (مع تطبيق التشخيص الملون مع البنفسجي الجنطيانا على قطرة من مصل الدم).

تفاعل التراص الإرشادي (RA)

لتحديد الكائنات الدقيقة المعزولة ، ضع RA تقريبيًا على الشرائح. لهذا الغرض ، يتم إضافة ثقافة العامل الممرض إلى قطرة من مصل مضاد تشخيصي قياسي (التخفيف 1:10 ، 1:20). إذا كانت النتيجة إيجابية ، يتم تعيين تفاعل تفصيلي مع زيادة التخفيف من المصل المضاد.

ردة الفعلتعتبر إيجابية إذا لوحظ تراص في التخفيفات القريبة من عيار مصل التشخيص.

OAS. الجسدية O-Agمستقرة حرارياً ويمكنها تحمل الغليان لمدة ساعتين.عند التفاعل مع AT ، فإنها تشكل مجاميع دقيقة الحبيبات.

H-Ag. H-Ag (سوط)قابلة للتحلل بالحرارة وتتحلل بسرعة عند 100 درجة مئوية ، وكذلك تحت تأثير الإيثانول. في التفاعلات مع H-antiserum ، بعد ساعتين من الحضانة ، تتشكل رقائق كبيرة فضفاضة (تتكون من البكتيريا الملتصقة مع الأسواط).

Vi-Arبكتيريا التيفود قابلة للحرارة نسبيًا (تتحمل درجات حرارة تتراوح من 60 إلى 62 درجة مئوية لمدة ساعتين) ؛ عندما يتم تحضينها باستخدام Vi-antiserum ، يتم تكوين تراص دقيق الحبيبات.

تفاعلات التراص الدموي المباشرة

أبسط من هؤلاء تفاعلات - التلصيقكريات الدم الحمراء ، أو التراص الدموي ، تستخدم لتحديد فصائل الدم في نظام AB0. لتحديد التلصيق(أو عدم وجودها) باستخدام مضادات قياسية مع مضادات A و B-agglutinins. يسمى التفاعل المباشر ، لأن Ag الذي تم فحصه عبارة عن مكونات طبيعية لكريات الدم الحمراء.

مشترك مع التراص الدموي المباشرآليات التراص الدموي الفيروسي. العديد من الفيروسات قادرة على تلصيق كريات الدم الحمراء للطيور والثدييات تلقائيًا ؛ إضافة إلى تعليق كريات الدم الحمراء يؤدي إلى تكوين مجاميع منها.

يوفر الموقع معلومات أساسية لأغراض إعلامية فقط. يجب أن يتم تشخيص وعلاج الأمراض تحت إشراف أخصائي. جميع الأدوية لها موانع. مطلوب استشارة متخصصة!

المصلي فحص الدمإنه بعيد البحوث المخبريةبعض المستضدات أو الأجسام المضادة ( بروتينات معينة) في مصل دم المريض ، بناءً على استجابات الجسم المناعية. يتم استخدام هذه الطريقة عندما التشخيصللكشف عن الأمراض المعدية عن وجود أجسام مضادة في دم المريض لنوع معين من الفيروسات أو البكتيريا ، وكذلك لتحديد انتماء فصيلة الدم.

المواد الدراسية

بادئ ذي بدء ، يتم استخدام المواد البيولوجية التي يتم جمعها من المريض للتحليل المصلي:

• مصل الدم
• اللعاب
• براز

في بعض الحالات ، يتم فحص المواد المعزولة عن كائنات بيئية معينة:

• التربة

طريقة التحليل أو أخذ عينات الدم

لا يتطلب هذا التحليل إعدادًا خاصًا من المريض. يتم أخذ عينات الدم في الصباح على معدة فارغة ويتم إجراؤها في غرف العلاج في المؤسسات الطبية ، وفقًا لطرق أمراض الدم المقبولة عمومًا. للفحص المصلي ، يتم أخذ عينات الدم بطريقتين: يتم أخذ الدم الوريدي من الوريد الزندي للمريض ، والدم الشعري من البنصر... يوضع الدم في أنابيب معقمة محكمة الغلق.

ميزات نقل الدم وتخزين المصل

مباشرة بعد أخذ الدم ، يتم نقله إلى معمل خاص ، حيث يتم تحضير المصل في نفس اليوم. لا يُسمح بتخزين مصل اللبن لأكثر من 4-6 أيام في الثلاجة عند درجة حرارة 2-4 درجات. في حالة الحاجة إلى تخزين أطول ، يتم تجميد المصل. من أجل تجنب الإخلال بجودة مصل اللبن ، يُسمح بتجميده مرة واحدة ، وبالتالي تذويبه. مع التخزين المطول ، تفقد الأجسام المضادة خصائصها وتصبح غير نشطة جزئيًا ، والأكثر حساسية للتجميد هي الغلوبولين المناعي من الفئة م... بعد إذابة المصل ، من الضروري تحريكه جيدًا حتى كتلة متجانسة ، مما يساعد على استعادة تركيز الأجسام المضادة الموجودة في هذا المصل.

ما هو استخدام الأمصال؟

الطرق المصلية التشخيص المختبريتستخدم للكشف عن أمراض مثل داء المشوكات ، داء الشعرينات ، داء المقارز ، توسع الورك ، داء الكيسات المذنبة ، داء المقوسات ، داء الزخار ، داء الجياردياتلتحديد مدى فعالية مسار العلاج ، وأخيرًا للكشف عن تكرار المرض بعد تعافي المريض تمامًا.

الطرق الأساسية للتشخيص المصلي

تفاعل التألق المناعي (RIF)

هذا التفاعل هو نسخة غير مباشرة من دراسة مصلية ، أي يتم إجراؤه على مرحلتين. في المرحلة الأولى ، يتم تحديد الجسم المضاد المطلوب في مركب الجسم المضاد المنتشر باستخدام مضاد الغلوبولين ، والذي يشبه في تركيبه بروتينات المصل المناعي. من الممكن أيضًا اكتشاف الجسم المضاد المطلوب عند دراسة تحضير مستضد مُعد مسبقًا تحت مجهر مضيء ، دون استخدام مضادات الغلوبولين.

رد الفعل المناعي هو عملية تستغرق وقتًا طويلاً وتتطلب الكثير من الوقت والمسؤولية من أحد المتخصصين. يبدأ التفاعل بتحضير المحاليل ، ثم يتم معايرة الأمصال وعينات التحكم الخاصة بهم ( عملية تسمح لك بتحديد محتوى مادة معينة عن طريق خلط محلول الاختبار تدريجيًا بكمية خاضعة للرقابة من الكاشف). يتم تطبيق التخفيفات المعدة مسبقًا وعينات التحكم الخاصة بهم بعناية على الشرائح باستخدام المستضد. ثم يتم تحضين المستحضرات ، يليها الغسيل والتجفيف بالهواء. يتم تطبيق مصل مضاد على الزجاج مع طبقة رقيقة من المستضد ، وبعد ذلك يتم إجراء الحضانة الثانوية للمستحضرات ، وتتكرر سلسلة الإجراءات السابقة بأكملها ، وتنتهي بتجفيف المستحضر. نتيجة لذلك ، يتم معالجة التحضير على شريحة زجاجية بالجلسرين وفحصها تحت مجهر الفلورسنت.

يتم تقييم نتائج التفاعل الذي تم إجراؤه على مقياس من أربع نقاط ، والذي يتميز بكثافة التوهج الأصفر والأخضر لخلايا المستضد:
+ توهج ضعيف جدًا للخلية ، يمكن ملاحظته فقط على محيطها
++ تلألؤ ضعيف لمحيط الخلية ، ولكن مع صبغة خضراء ملحوظة بشكل واضح
+++/++++ توهج أخضر لامع لمحيط الخلية
يعتبر عيار التفاعل بمثابة تخفيف للمصل ، حيث تظهر 50٪ على الأقل من خلايا المستضد توهجًا سطحيًا واضحًا ، أي نتيجة التفاعل +++ أو ++++ ... نطاق التفاعل من 1/80 إلى 1/100.

تعتمد شدة التفاعل على عدد كريات الدم الحمراء المترسبة في قاع الآبار المشكلة:
– رد فعل سلبي يتميز بترسيب كريات الدم الحمراء في قاع الآبار على شكل حلقة صغيرة ذات حواف ناعمة أو "أزرار".
+ كثافة منخفضة ، يتميز هذا التفاعل برواسب مفردة صغيرة في قاع الحفرة. تشكل خلايا الدم الحمراء غير المتراصة "حلقة صغيرة" في وسط الثقب
++ متوسطة الشدة ، وتتميز بتكوين "حلقة كثيفة واسعة" من كريات الدم الحمراء غير المتراصة في قاع البئر
+++ تفاعل مكثف ، تشكل كريات الدم الحمراء المتراصة ما يسمى بـ "المظلات" ، وفي وسطها تكون الحلقات المتكونة من كريات الدم الحمراء غير المتراصة واضحة للعيان
++++ تفاعل شديد حاد حيث تتراكم جميع كريات الدم الحمراء وتشكل "مظلات" تبطن قاع الآبار.
يعتبر عيار هذا التفاعل هو التخفيف الأخير للمصل ، حيث يتم الكشف عن تراص واضح لكريات الدم الحمراء على الأقل +++ ، أي مع رد فعل شديد أو شديد الحدة.

تعتمد موثوقية وجودة طرق التشخيص المصلي على تنظيم مراقبة المختبر الداخلية والخارجية ، والتي تتكون من عدة إجراءات مستقلة مصممة لتقييم جودة نتائج التحليل.

تفاعل التجلط الدموي غير المباشر ، RNGA
(اختبار التراص الدموي غير المباشر)

طريقة للكشف عن المستضدات والأجسام المضادة ، بناءً على قدرة كريات الدم الحمراء ، والتي تم امتصاصها مسبقًا لمضادات الضد أو الأجسام المضادة ، على التراص في وجود الأمصال المتماثلة أو المستضدات المقابلة.

عندما يتم الكشف عن المستضدات ، يشار إلى التفاعل عن طريق التراص الدموي السلبي العكسي - ROPHA (اختبار التراص الدموي السلبي المعكوس) ، وعندما يتم الكشف عن الأجسام المضادة - عن طريق التراص الدموي السلبي - RPHA (اختبار التراص الدموي السلبي). وجد RNGA تطبيقًا واسعًا للكشف عن العلامات المصلية لعدوى فيروس التهاب الكبد B ، وخاصة HBsAg والأجسام المضادة له.

حاليًا ، تم تطوير طرق مختلفة لتصنيع تشخيصات كرات الدم الحمراء ، تختلف في طرق توعية كريات الدم الحمراء (باستخدام التانين ، الجلوتارالدهيد ، كلوريد الكروم ، الريفانول ، إلخ) ، وأنواعها (الإنسان ، الكبش ، الدجاج ، الديك الرومي ، إلخ.) .) ، خيارات لإعداد التفاعل (في أطباق ميكروتيتر ، في أنابيب الاختبار ، والشعيرات الدموية ، وما إلى ذلك) وتسجيل النتائج (المرئية والأدوات). يتم إنتاج تشخيصات كرات الدم الحمراء للكشف عن HBsAg ومضادات HB من قبل العديد من المؤسسات والشركات في بلدنا وفي الخارج.

في أغلب الأحيان ، يتم إجراء RNGA في ألواح ميكروترية ، حيث يتم تحضير تخفيفات مصل الاختبار وعينات التحكم بشكل أولي. بعد إدخال تشخيص وحضانة كرات الدم الحمراء ، يتم تسجيل نتائج التفاعل. العينات التي فيها تراص كريات الدم الحمراء ، والتي تبدو مثل "المظلة" المقلوبة ، تعتبر إيجابية. في حالة حدوث رد فعل سلبي ، تستقر كريات الدم الحمراء في قاع البئر على شكل حلقة أو قرص.

لتأكيد خصوصية النتائج التي تم الحصول عليها ، يتم إجراء التفاعل باستخدام تشخيص "تجريبي" لكريات الدم الحمراء (أي ، تحسس كريات الدم الحمراء بمستضد أو أجسام مضادة) ومع تشخيص "تحكم" (أي ، لا يتم تحسس كريات الدم الحمراء بمستضد أو الأجسام المضادة). يشير وجود رد فعل إيجابي مع عقار "التحكم" التشخيصي إلى وجود تفاعل إيجابي كاذب. للتخلص من التفاعلات غير المحددة ، يتم علاج مصل الاختبار بكريات الدم الحمراء غير الحساسة. أحد المتطلبات الأساسية لإجراء RNGA هو تفاعل التعادل ، أي اختبار تأكيد.

بالمقارنة مع طرق مثل RPG و VIEF و RSC ، فإن تفاعل التراص الدموي غير المباشر يكون له حساسية أعلى (200-400 مرة). وهكذا ، يمكن الكشف عن HBsAg في RPHA بتركيزات من 6-10 نانوغرام / مل. حدّدت بساطة التفاعل والسرعة (20-30 دقيقة) الاستخدام الواسع لهذه الطريقة في خدمة نقل الدم للكشف عن HBsAg.

بالإضافة إلى تشخيصات كرات الدم الحمراء للكشف عن HBsAg ومضادات HBs ، تم تطوير الاستعدادات التشخيصية للكشف عن مضادات HBc و HBc class IgM (متغير المرحلة الصلبة) و HBeAg و HBeAg و HBeAg ومستضد فيروس التهاب الكبد A والأجسام المضادة له ، ومع ذلك ، كلهم ​​لم يجدوا تطبيقًا.في الرعاية الصحية العملية.