این واکنش برای شناسایی آنتی ژن های پاتوژن در ماده آزمایش با افزودن سرم ایمنی به آن انجام می شود. در حضور یک آنتی ژن همولوگ، اتصال آنتی بادی ها رخ می دهد، بنابراین، پس از افزودن گلبول های قرمز حساس شده با آنتی ژن، آگلوتیناسیون آنها اتفاق نمی افتد، که به عنوان یک نتیجه مثبت ارزیابی می شود. برای حساسیت بیشتر واکنش، یک سرم ایمنی خاص در حداقل مقدار (2 واحد هماگلوتینه) به ماده آزمایش اضافه می شود. تیتر سرم ایمنی قبلاً با استفاده از RNGA تعیین می شود. برای یک واحد هماگلوتینه کننده، رقت محدود سرم گرفته می شود که باعث چسبندگی گلبول های قرمز می شود.

روش شناسی. در چاهک های پلی استایرن یا لوله های آگلوتیناسیون 0.025 میلی لیتر محلول 1٪ سرم خرگوش معمولی اضافه کنید و رقت های 2 برابری از مواد آزمایش را انجام دهید. سپس 0.025 میلی لیتر سرم ایمنی به تمام چاهک ها اضافه می شود، پلیت تکان داده می شود و به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی گراد یا به مدت 1 ساعت در دمای اتاق قرار می گیرد. سپس 0.025 میلی‌لیتر آنتی‌ژن دیاگستیکوم به همه چاهک‌ها اضافه می‌شود و تکان داده می‌شود و به مدت 2 ساعت باقی می‌ماند و پس از آن نتایج در نظر گرفته می‌شود.

هنگام انجام این واکنش، کنترل ویژگی سرم ایمنی به کنترل RNGA اضافه می شود که شامل یک آنتی ژن خاص، سرم ایمنی (2، 1، 0.5 واحد هماگلوتینه کننده) و سوسپانسیون گلبول های قرمز حساس شده است.

RTNGA همچنین برای تشخیص آنتی‌بادی‌های خاص (کامل و مسدودکننده) استفاده می‌شود که برای آن مقدار دوز آنتی‌ژن به سرم آزمایش اضافه می‌شود. اگر حاوی آنتی بادی باشد، آنتی ژن آنها متصل می شود، بنابراین، پس از افزودن گلبول های قرمز حساس به آنتی بادی (مرحله دوم RTNGA)، گلبول های قرمز به هم نمی چسبند.

به دلیل استفاده از حداقل مقدار آنتی ژن (2 دوز خنثی کننده)، واکنش بسیار حساس است. تعداد دوزهای خنثی کننده در آماده سازی آنتی ژنی با استفاده از RNGA تعیین می شود، در حالی که رقت های سریالی 2 برابری آنتی ژن در محلول 1٪ سرم خرگوش معمولی ساخته می شود و یک آنتی بادی erythrocyte diagnosticum به چاهک ها وارد می شود. دوز خنثی کننده آنتی ژن حداکثر رقت آن در نظر گرفته می شود که باعث چسبندگی کامل گلبول های قرمز حساس می شود.

قبل از واکنش، سرم های آزمایش شده 1: 5-1: 10 رقیق شده و در دمای 56 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه غیرفعال می شوند. برای جذب هماگلوتینین ها، یک سوسپانسیون 50% از گلبول های قرمز فرمالین شده یا تازه شسته شده قوچ به میزان 0.1 میلی لیتر سوسپانسیون در هر 1 میلی لیتر سرم رقیق شده به سرم اضافه می شود. مخلوط تکان داده می شود و به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد یا 1 ساعت در دمای اتاق انکوبه می شود و پس از آن گلبول های قرمز با سانتریفیوژ رسوب می کنند. می توان تا روز بعد سرم را در یخچال گذاشت تا گلبول های قرمز رسوب کند.

در طول آزمایش، مواد مورد آزمایش در محلول 1% سرم خرگوش معمولی در حجم 0.025 میلی لیتر در چاهک های پانل میکروتیتر رقیق می شود. سپس 2 دوز خنثی کننده آنتی ژن در حجم 0.025 میلی لیتر به هر چاهک اضافه می شود. صفحات را تکان داده و به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد یا به مدت 1 ساعت در دمای اتاق قرار می دهند. سپس 0.025 میلی لیتر آنتی بادی erythrocyte diagnosticum به همه چاهک ها اضافه می شود. صفحات تکان داده شده و به مدت 1.5-2 ساعت در دمای اتاق انکوبه می شوند و پس از آن نتایج واکنش در نظر گرفته می شود. حسابداری نیز می تواند روز بعد انجام شود. تیتر سرم آزمایش حداکثر رقت آن در نظر گرفته می شود که در آن هیچ چسبندگی گلبول های قرمز وجود ندارد.

تجربه با انواع کنترل های زیر همراه است:

1) ثبات گلبول های قرمز حساس (گلبول های قرمز + 1٪ محلول سرم خرگوش طبیعی).

2) کامل بودن کاهش هماگلوتینین در هر سرم آزمایشی (سرم آزمایش در کمترین رقت + گلبول های قرمز رسمی).

3) صحت تعیین حداقل دوز خنثی کننده آنتی ژن (2، 1 و 0.5 دوز خنثی کننده آنتی ژن + آنتی بادی erythrocyte diagnosticum).

واکنش بازخورد هماگلوتیناسیون غیر مستقیم(ronga) برای نشان دادن آنتی ژن های باکتریایی و ویروسی در مواد آزمایشی و همچنین برای تشخیص سریع تعدادی از عفونت ها استفاده می شود.

برخلاف RNGA، در این واکنش، گلبول های قرمز نه با آنتی ژن، بلکه با آنتی بادی ها حساس می شوند که با افزودن آنتی ژن، آگلوتیناسیون آنها اتفاق می افتد.

گلبول های قرمز ابتدا با فرمالین یا گلوتارآلدئید تثبیت می شوند و سپس با گاما گلوبولین که از سرم های ایمنی جدا شده و از سایر پروتئین های سرم خالص می شود، متصل می شوند. اتصال گاما گلوبولین به سطح گلبول های قرمز با کمک کروم کلرید اتفاق می افتد. برای این کار، 1 حجم ایمونوگلوبولین های جدا شده از سرم ایمنی، 1 حجم سوسپانسیون 50 درصد گلبول های قرمز فرمالین شده و 1 حجم محلول 0.1-0.2 درصد کلرید کروم به 8 حجم آب مقطر اضافه می شود. مخلوط به مدت 10-15 دقیقه در دمای اتاق باقی می ماند، سپس گلبول های قرمز مانند یک واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال درمان می شوند.

ویژگی آنتی بادی تشخیصی در واکنش مهار هماگلوتیناسیون غیرفعال توسط یک آنتی ژن همولوگ بررسی می شود. واکنش باید توسط یک آنتی ژن همولوگ حداقل 16 بار مهار شود و توسط یک آنتی ژن هترولوگ مهار نشود. کنترل برای عدم وجود هماگلوتیناسیون خود به خودی استفاده می شود.

با کمک این واکنش، نشانه ای از عوامل بیماری زا در مواد گرفته شده از اندام های افراد مرده و حیوانات، به عنوان مثال، از مغز، طحال، کبد ریه ها انجام می شود. سوسپانسیون 10 درصدی از این اندام ها را در محلول ایزوتونیک کلرید سدیم تهیه کنید، آنها را به مدت 30-60 دقیقه با سرعت 10000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید و از مایع رویی به عنوان آنتی ژن استفاده کنید.

روش شناسی.رقت های 2 برابری از مواد مورد آزمایش (آنتی ژن) را در محلول تثبیت کننده آماده کنید. 1 قطره از هر رقت آنتی ژن را به 3 چاه مجاور میکروپانل اضافه کنید (واکنش به 3 ردیف چاهک موازی نیاز دارد). به هر چاهک ردیف اول 1 قطره محلول تثبیت کننده، 1 قطره سرم ایمنی همولوگ با رقت 1:10 به چاهک های ردیف دوم، 1 قطره سرم ایمنی هترولوگ در ردیف سوم اضافه کنید. ردیف دوم و سوم به عنوان کنترل برای ویژگی پاسخ خدمت می کنند. مخلوط به مدت 20 دقیقه در دمای اتاق باقی می ماند.

به همه چاهک ها 1 قطره از سوسپانسیون 1% گلبول های قرمز حساس (آنتی بادی گلبول قرمز تشخیصی) اضافه کنید و صفحات را کاملا تکان دهید. نتایج واکنش پس از 30-40 دقیقه در نظر گرفته می شود. در حضور یک آنتی ژن خاص، هماگلوتیناسیون در ردیف اول و سوم (با سرم هترولوگ) مشخص می شود و در ردیف دوم وجود ندارد، جایی که آنتی ژن قبلا با سرم همولوگ خنثی شده است.

این واکنش با کنترل گلبول های قرمز حساس برای آگلوتیناسیون خود به خود همراه است.

واکنش مهار هماگلوتیناسیون غیر مستقیم معکوس (RTONGA)به شما امکان می دهد وجود آنتی بادی ها را در سرم های انسان و حیوانات تعیین کنید.

روش شناسی. سرم ها 10 بار با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک رقیق شده و به مدت 20 دقیقه در دمای 65 درجه سانتیگراد حرارت داده می شود تا مهارکننده های غیر اختصاصی از بین بروند و سپس رقت های 2 برابری از سرم ها در محلول تثبیت کننده و دوز کاری آنتی ژن حاوی 4 واحد آگلوتینه کننده تهیه می شوند. 1 قطره از هر رقت سرم را به چاهک های میکروپانل اضافه کنید و 1 قطره آنتی ژن به آنها اضافه کنید که رقت آن مطابق با دوز کاری است. پس از تماس اجزای مخلوط به مدت 20 دقیقه در دمای اتاق، 1 قطره آنتی بادی گلبول قرمز تشخیصی به همه چاهک ها اضافه شده و کاملا تکان داده می شود. پس از 1.5-2 ساعت انکوباسیون در دمای اتاق، نتایج واکنش با هماگلوتیناسیون در نظر گرفته می شود. تیتر سرم بزرگترین رقت آن است که واکنش هماگلوتیناسیون را با چهار واحد آنتی ژن آگلوتیناسیون کاملاً مهار می کند.

واکنش با کنترل گلبول های قرمز حساس برای آگلوتیناسیون خود به خود در حضور: الف) محلول تثبیت کننده همراه است. ب) آنتی ژن طبیعی (از موادی که حاوی ویروس نیستند). ج) سرم آزمایش مزیت واکنش در تطبیق پذیری آن و امکان استفاده از آن برای تشخیص آنتی ژن های مختلف است.

ارزیابی نتایج هماگلوتیناسیون. نتایج RNGA، RONGA و RTONGA با توجه به درجه آگلوتیناسیون گلبول های قرمز در نظر گرفته می شود: (++++) - آگلوتیناسیون کامل. (+++) - آگلوتیناسیون کامل کمتر؛ (++) - آگلوتیناسیون جزئی؛ (+) - آثار آگلوتیناسیون؛ (-) - بدون آگلوتیناسیون.

اگر آگلوتیناسیون کامل (++++) یا تقریباً کامل (+++) باشد، واکنش مثبت در نظر گرفته می شود، تشخیص آگلوتیناسیون خود به خود در حضور هر یک از اجزای واکنش نشان نمی دهد، و کنترل ویژگی آنتی ژن یا آنتی بادی مثبت است.

واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم یا غیرفعال (RNGA یا RPHA) نسبت به واکنش آگلوتیناسیون حساس‌تر و اختصاصی‌تر است. این واکنش نیز به دو صورت استفاده می شود.

1) برای تشخیص آنتی بادی در سرم خون بیمار از دستگاه تشخیص گلبول قرمز استفاده می شود که در آن آنتی ژن در سطح گلبول های قرمز تیمار شده با تانن جذب می شود. در رابطه با این واکنش اغلب از اصطلاح RPHA استفاده می شود.

سرم آزمایش در چاهک های پلیت های پلاستیکی رقیق شده و گلبول های قرمز تشخیصی اضافه می شود. با یک واکنش مثبت، یک فیلم نازک در امتداد دیواره های سوراخ به شکل یک "چتر توری" ظاهر می شود، با یک واکنش منفی - یک رسوب متراکم از گلبول های قرمز به شکل یک "دکمه".

2) برای تشخیص سموم و آنتی ژن های باکتریاییدر ماده آزمایش، از تشخیص آنتی بادی گلبول قرمز استفاده می شود که از طریق جذب آنتی بادی ها روی گلبول های قرمز به دست می آید. در رابطه با این واکنش اغلب از اصطلاح RNGA استفاده می شود. به عنوان مثال، آنتی ژن باسیل طاعون، اگزوتوکسین دیفتری، اگزوتوکسین بوتولینوم با کمک تشخیص آنتی بادی شناسایی می شود.

واکنش کومبز (تست آپتی گلوبولین)

این واکنش برای تشخیص آنتی بادی های ناقص، به عنوان مثال، آنتی بادی های فاکتور Rh استفاده می شود. به گلبول های قرمز + Rh، سرم آزمایشی را اضافه کنید که در آن وجود آنتی بادی های ناقص برای فاکتور Rh در نظر گرفته شده است. با اتصال به گلبول های قرمز، آنتی بادی های ناقص باعث آگلوتیناسیون نمی شوند، زیرا آنها فقط یک مرکز فعال دارند. سپس سرم آنتی گلوبولین حاوی آنتی بادی را به گلوبولین های انسانی اضافه کنید. هنگامی که با آنتی بادی های ناقص ترکیب می شود، سرم آنتی گلوبولین باعث آگلوتیناسیون گلبول های قرمز می شود.

واکنش بارش

ماهیت واکنش رسوب (رسوب) آنتی ژن تحت تأثیر آنتی بادی های خاص است. وجود یک الکترولیت برای به دست آوردن یک واکنش قابل مشاهده ضروری است. آنتی ژن در واکنش رسوب، مواد پراکنده مولکولی است.

واکنش بارش حلقه ایدر لوله های باریک بارش قرار می گیرد. سرم ایمنی داخل یک لوله آزمایش ریخته می شود، مواد آزمایش به دقت روی آن لایه می شود. در حضور آنتی ژن در آن، یک حلقه رسوب مات در مرز دو مایع تشکیل می شود.

این واکنش در پزشکی قانونی برای تعیین گونه های پروتئین موجود در آن استفاده می شود لکه های خون، در مایع منی و غیره؛ برای تعیین آنتی ژن در تشخیص سیاه زخم (واکنش آسکولی)، مننژیت و سایر عفونت ها. در تحقیقات بهداشتی و بهداشتی - برای ایجاد جعل محصولات غذایی... سرم های رسوب کننده ایمنی با ایمن سازی حیوانات با آنتی ژن مناسب به دست می آیند. به عنوان مثال، سرم رسوب دهنده پروتئین انسانی با ایمن سازی یک خرگوش با پروتئین انسانی به دست می آید. تیتر سرم رسوب دهنده بزرگترین رقت آنتی ژنی است که با آن واکنش نشان می دهد. سرم معمولاً رقیق نشده یا با رقت 1:5 استفاده می شود.

واکنش رسوب ژل آگاربا چندین روش انجام می شود. این یک واکنش ایمونودیفیوژن مضاعف، یک واکنش ایمونودیفیوژن شعاعی، یک واکنش ایمونوالکتروفورز است.

واکنش ایمونودیفیوژن مضاعف(به گفته Ouchterloni). ژل آگار ذوب شده را در ظرف پتری ریخته و پس از انجماد، چاه هایی در آن بریده می شود. آنتی ژن در برخی از چاه ها قرار می گیرد، در برخی دیگر - سرم های ایمنی که در آگار منتشر می شوند، رسوبی را به شکل نوارهای سفید در نقطه ملاقات تشکیل می دهند.

واکنش ایمونودیفیوژن شعاعی(به گفته مانچینی). سرم ایمنی به ژل آگار ذوب شده اضافه می شود و در یک ظرف ریخته می شود. پس از جامد شدن آگار، چاه هایی در آن بریده می شود و آنتی ژن هایی در آن قرار می گیرند که با انتشار در آگار، مناطق بارش دایره ای را در اطراف چاه ها تشکیل می دهند. هر چه غلظت آنتی ژن بیشتر باشد، قطر حلقه بزرگتر است. این واکنش، به عنوان مثال، برای تعیین کلاس های مختلف ایمونوگلوبولین ها در خون استفاده می شود. ایمونوگلوبولین‌های کلاس‌های IgG، IgM، IgA در این واکنش به‌عنوان آنتی‌ژن عمل می‌کنند و آنتی‌بادی‌هایی علیه آن‌ها در سرم‌های تک گیرنده اختصاصی وجود دارند.

ایمونوالکتروفورزالکتروفورز آنتی ژن های پروتئینی در ژل آگار انجام می شود. در شیار، که به موازات جهت حرکت پروتئین ها قرار دارد، سرم رسوب کننده معرفی می شود. آنتی ژن ها و آنتی بادی ها در آگار منتشر می شوند و خطوط بارش در نقطه ملاقات تشکیل می شود.

واکنش های لیز ایمنی

یک آنتی ژن (گلبول های قرمز یا باکتری)، هنگامی که با آنتی بادی های خاص ترکیب می شود، یک کمپلکس ایمنی را تشکیل می دهد که مکمل (C1) به آن متصل است و مکمل توسط مسیر کلاسیک فعال می شود. مکمل فعال شده گلبول های قرمز خون (همولیز) یا باکتری ها (باکتریولیز) را لیز می کند. از واکنش باکتریولیز برای شناسایی ویبریوکلرا استفاده می شود.

واکنش همولیزآنتی ژن در واکنش گلبول های قرمز است، آنتی بادی ها (همولیزین ها) در سرم همولیتیک موجود است. همولیزین ها به گلبول های قرمز می چسبند، مکمل فعال می شود که گلبول های قرمز را لیز می کند. یک سوسپانسیون کدر از گلبول های قرمز به یک مایع شفاف قرمز روشن تبدیل می شود - "خون لاک". از آنجایی که واکنش همولیز فقط در حضور مکمل رخ می دهد، به عنوان شاخصی برای تشخیص مکمل استفاده می شود.

واکنش همولیز موضعی در ژل(واکنش ارنه) - گونه ای از واکنش همولیز. برای تعیین تعداد سلول های تولید کننده آنتی بادی (AOC) در طحال و غدد لنفاوی عمل می کند.

ژل آگار ذوب شده با سوسپانسیون سلول های طحال و گلبول های قرمز مخلوط می شود و پس از اینکه آگار گیر کرد، مکمل اضافه می شود. یک ناحیه همولیز در اطراف هر سلول تولید کننده همولیزین تشکیل می شود. تعداد چنین مناطقی برای تعیین تعداد سلول های تولید کننده همولیزین استفاده می شود.

فهرست مطالب "تعدیل کننده های ایمنی. تشخیص ایمنی بیماری های عفونی.":

واکنش آگلوتیناسیون گسترده (RA). برای تعیین AT در سرم خون بیمار قرار دهید واکنش آگلوتیناسیون گسترده (RA)... برای این، یک تشخیص به یک سری از رقت های سرم خون اضافه می شود - یک سوسپانسیون از میکروارگانیسم های کشته شده یا ذرات با Ag جذب شده. حداکثر رقت دادن آگلوتیناسیون Ag را تیتر سرم می نامند.

انواع واکنش آگلوتیناسیون (RA) برای تشخیص AT - آزمایش قطره خون برای تولارمی (با استفاده از تشخیص بر روی یک قطره خون و ظاهر آگلوتینات های سفید رنگ قابل مشاهده) و واکنش هادلسون به بروسلوز (با استفاده از تشخیصی رنگی با بنفش جنسی به یک قطره از سرم خون).

واکنش آگلوتیناسیون نشانگر (RA)

برای شناسایی میکروارگانیسم های جدا شده، RA تقریبی را روی اسلایدها قرار دهید. برای این کار، کشت پاتوژن به قطره یک آنتی سرم تشخیصی استاندارد (رقت 1:10، 1:20) اضافه می شود. اگر نتیجه مثبت باشد، یک واکنش دقیق با افزایش رقت آنتی سرم تنظیم می شود.

واکنشاگر آگلوتیناسیون در رقت های نزدیک به تیتر سرم تشخیصی مشاهده شود، مثبت در نظر گرفته می شود.

OAS. سوماتیک O-Agاز نظر حرارتی پایدار هستند و می توانند به مدت 2 ساعت در برابر جوشیدن مقاومت کنند و هنگام تعامل با AT، سنگدانه های ریزدانه را تشکیل می دهند.

H-Ag. H-Ag (تاژک دار)حرارت پذیر هستند و به سرعت در 100 درجه سانتیگراد و همچنین تحت تأثیر اتانول تجزیه می شوند. در واکنش با آنتی سرم H، پس از 2 ساعت انکوباسیون، تکه های بزرگ شل تشکیل می شوند (در اثر چسبیدن باکتری ها به هم با تاژک ها).

Vi-Arباکتری تیفوئید نسبتاً مقاوم در برابر حرارت هستند (در دمای 60-62 درجه سانتیگراد به مدت 2 ساعت مقاومت می کند). هنگامی که با آنتی سرم Vi انکوبه می شود، آگلوتینات ریز دانه تشکیل می شود.

واکنش های هماگلوتیناسیون مستقیم

ساده ترین اینها واکنش ها - آگلوتیناسیونگلبول های قرمز یا هماگلوتیناسیون برای تعیین گروه های خونی در سیستم AB0 استفاده می شود. برای تعیین آگلوتیناسیون(یا عدم وجود آن) با استفاده از آنتی سرم های استاندارد با آگلوتینین های ضد A و ضد B. واکنش مستقیم نامیده می شود، زیرا نقره مورد بررسی اجزای طبیعی گلبول های قرمز هستند.

مشترک با هماگلوتیناسیون مستقیممکانیسم ها هماگلوتیناسیون ویروسی دارند. بسیاری از ویروس ها قادرند گلبول های قرمز پرندگان و پستانداران را به طور خود به خود آگلوتینه کنند؛ افزودن آنها به سوسپانسیون گلبول های قرمز باعث تشکیل توده هایی از آنها می شود.

این سایت اطلاعات پس زمینه را فقط برای مقاصد اطلاعاتی ارائه می دهد. تشخیص و درمان بیماری ها باید زیر نظر پزشک متخصص انجام شود. همه داروها منع مصرف دارند. مشاوره تخصصی لازم است!

سرولوژیکی آزمایش خوندور تحقیقات آزمایشگاهیآنتی ژن ها یا آنتی بادی های خاص ( پروتئین های خاص) در سرم خون بیمار بر اساس پاسخ های ایمنی بدن. این روش زمانی استفاده می شود که تشخیصیبیماری های عفونی برای تشخیص وجود آنتی بادی در خون بیمار به نوع خاصی از ویروس ها یا باکتری ها و همچنین تعیین وابستگی گروهی خون.

مطالب مطالعه

اول از همه، مواد بیولوژیکی جمع آوری شده از بیمار برای تجزیه و تحلیل سرولوژیکی استفاده می شود:

• سرم خون
• بزاق
• مدفوع

در برخی موارد، مواد جدا شده از اشیاء محیطی خاص مورد بررسی قرار می گیرند:

• خاک

روش آنالیز یا نمونه گیری خون

این تجزیه و تحلیل نیازی به آماده سازی خاصی از بیمار ندارد. نمونه گیری خون در صبح با معده خالی انجام می شود و در اتاق های درمان موسسات پزشکی، طبق روش های هماتولوژیکی پذیرفته شده عمومی انجام می شود. برای معاینه سرولوژی، خونگیری به دو صورت انجام می شود: خون وریدی از ورید اولنار بیمار و خون مویرگی از ورید اولنار بیمار گرفته می شود. انگشت حلقه... خون در لوله های مهر و موم شده استریل قرار می گیرد.

ویژگی های انتقال خون و ذخیره سازی سرم

بلافاصله پس از گرفتن خون به آزمایشگاه مخصوص منتقل می شود و در همان روز سرم تهیه می شود. نگهداری آب پنیر بیش از 4 تا 6 روز در یخچال با دمای 2 تا 4 درجه مجاز نیست. در صورت نیاز به نگهداری طولانی تری، سرم منجمد می شود. به منظور جلوگیری از برهم زدن کیفیت آب پنیر، مجاز است یک بار آن را منجمد کرده و بر این اساس، آب پنیر را ذوب کنید. با نگهداری طولانی مدت، آنتی بادی ها خواص خود را از دست می دهند و تا حدی غیر فعال می شوند، ایمونوگلوبولین های کلاس حساس ترین آنها به انجماد هستند. م... پس از ذوب شدن سرم، لازم است آن را کاملاً هم بزنید تا یک توده همگن حاصل شود که به بازیابی غلظت آنتی بادی های موجود در این سرم کمک می کند.

سرولوژی برای چه مواردی استفاده می شود؟

روش های سرولوژیکی تشخیص آزمایشگاهیبرای تشخیص بیماری هایی مانند اکینوکوکوزیس، تریکینوز، توکسوکاریازیس، اپیستورکیازیس، سیستیسرکوز، توکسوپلاسموز، آمیبیازیس، ژیاردیازیس، برای تعیین اثربخشی دوره درمان و در نهایت تشخیص عود بیماری پس از بهبودی کامل بیمار.

روش های اساسی تشخیص سرولوژیکی

واکنش ایمونوفلورسانس (RIF)

این واکنش نسخه غیر مستقیم یک مطالعه سرولوژیکی است، یعنی در دو مرحله انجام می شود. در مرحله اول، آنتی بادی مورد نیاز در مجموعه آنتی ژن-آنتی بادی در گردش با استفاده از آنتی گلوبولین شناسایی می شود که از نظر ساختاری مشابه پروتئین های سرم ایمنی است. تشخیص آنتی بادی مورد نظر همچنین هنگام مطالعه یک آنتی ژنیک آماده شده قبلی در زیر میکروسکوپ شب تاب بدون استفاده از آنتی گلوبولین ها امکان پذیر است.

واکنش ایمونوفلورسانس فرآیندی بسیار زمان بر است که مستلزم صرف زمان و مسئولیت زیادی از سوی متخصص است. واکنش با تهیه محلول ها آغاز می شود، سپس سرم ها و نمونه های کنترل آنها تیتر می شوند. فرآیندی که به شما امکان می دهد محتوای یک ماده خاص را با مخلوط کردن تدریجی محلول آزمایش با مقدار کنترل شده معرف تعیین کنید.). رقت های آماده شده قبلی و نمونه های کنترل آنها به دقت روی لام ها با آنتی ژن اعمال می شود. سپس آماده سازی ها انکوبه می شوند و به دنبال آن شستشو و خشک شدن در هوا انجام می شود. یک آنتی سرم با آنتی ژن در یک لایه نازک روی لیوان ها اعمال می شود، پس از آن انکوباسیون ثانویه آماده سازی انجام می شود و کل زنجیره اقدامات قبلی تکرار می شود و با خشک شدن آماده سازی پایان می یابد. در نتیجه، آماده سازی روی یک اسلاید شیشه ای با گلیسیرین درمان می شود و زیر یک میکروسکوپ فلورسنت بررسی می شود.

نتایج واکنش انجام شده در یک مقیاس چهار نقطه ای ارزیابی می شود که با شدت درخشش زرد-سبز سطح سلول های آنتی ژن مشخص می شود:
+ درخشش بسیار ضعیف سلول که فقط در حاشیه آن قابل توجه است
++ لومینسانس ضعیف پیرامون سلول، اما با رنگ سبز به وضوح قابل توجه
+++/++++ درخشش سبز روشن پیرامون سلول
تیتر واکنش چنین رقت سرم در نظر گرفته می شود، که در آن حداقل 50٪ از سلول های آنتی ژن درخشش سطحی شفاف را نشان می دهند، یعنی نتیجه واکنش. +++ یا ++++ ... محدوده واکنش از 1/80 تا 1/100 است.

شدت واکنش به تعداد گلبول های قرمز رسوب شده در کف چاهک های تشکیل شده بستگی دارد:
– واکنش منفی، که با رسوب گلبول های قرمز در پایین چاه ها به شکل یک حلقه کوچک با لبه های صاف یا "دکمه ها" مشخص می شود.
+ شدت کم، این واکنش با رسوبات منفرد کوچک در پایین سوراخ مشخص می شود. گلبول های قرمز غیر آگلوتینه شده یک "حلقه کوچک" در مرکز سوراخ تشکیل می دهند
++ با شدت متوسط، با تشکیل یک "حلقه متراکم گسترده" از گلبول های قرمز غیر آگلوتینه در کف چاه مشخص می شود.
+++ یک واکنش شدید، گلبول های قرمز آگلوتینه شده به اصطلاح "چتر" را تشکیل می دهند، که در مرکز آن حلقه های تشکیل شده توسط گلبول های قرمز ته نشین نشده به وضوح قابل مشاهده است.
++++ یک واکنش شدید شدید که در آن تمام گلبول های قرمز آگلوتینه می شوند و با تشکیل "چتر"، کف چاه ها را می پوشانند.
تیتر این واکنش آخرین رقت سرم در نظر گرفته می شود که حداقل در آن آگلوتیناسیون واضح گلبول های قرمز تشخیص داده می شود. +++ ، یعنی با یک واکنش شدید یا شدید.

قابلیت اطمینان و کیفیت روش های تشخیصی سرولوژیکی به سازماندهی کنترل آزمایشگاهی داخلی و خارجی بستگی دارد که شامل چندین روش مستقل است که برای ارزیابی کیفیت نتایج تجزیه و تحلیل طراحی شده است.

واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم، RNGA
(تست هماگلوتیناسیون غیر مستقیم)

روشی برای تشخیص آنتی‌ژن‌ها و آنتی‌بادی‌ها، بر اساس توانایی گلبول‌های قرمز، که قبلاً آنتی‌ژن‌ها یا آنتی‌بادی‌ها روی سطح آن جذب شده‌اند، برای آگلوتینه شدن در حضور سرم‌های همولوگ یا آنتی‌ژن‌های مربوطه.

هنگامی که آنتی ژن ها شناسایی می شوند، واکنش با هماگلوتیناسیون غیرفعال معکوس - ROPHA (تست هماگلوتیناسیون غیرفعال معکوس) و هنگامی که آنتی بادی ها شناسایی می شوند - با هماگلوتیناسیون غیرفعال - RPHA (تست هماگلوتیناسیون غیرفعال) نشان داده می شود. RNGA کاربرد گسترده ای برای تشخیص نشانگرهای سرولوژیکی عفونت ویروس هپاتیت B، به ویژه HBsAg و آنتی بادی های آن پیدا کرده است.

در حال حاضر روش‌های مختلفی برای ساخت دستگاه‌های تشخیصی گلبول‌های قرمز ابداع شده است که در روش‌های حساس‌سازی گلبول‌های قرمز (با استفاده از تانن، گلوتارآلدئید، کلرید کروم، ریوانول و غیره)، گونه‌های آنها (انسان، قوچ، مرغ، بوقلمون و غیره) متفاوت است. . )، گزینه هایی برای تنظیم واکنش (در صفحات میکروتیتر، در لوله های آزمایش، مویرگ ها و غیره) و ثبت نتایج (بصری و ابزاری). تشخیص گلبول های قرمز برای تشخیص HBsAg و anti-HBs توسط بسیاری از شرکت ها و شرکت ها در داخل و خارج از کشور تولید می شود.

اغلب، RNGA در صفحات میکروتیتر انجام می شود، که در آن رقت های سرم آزمایش و نمونه های کنترل از قبل آماده می شوند. پس از معرفی erythrocyte diagnosticum و انکوباسیون، نتایج واکنش ثبت می شود. نمونه هایی که در آنها آگلوتیناسیون گلبول های قرمز، که شبیه یک "چتر معکوس" است، مثبت در نظر گرفته می شود. در صورت واکنش منفی، گلبول های قرمز به شکل حلقه یا دیسک در کف چاه ته نشین می شوند.

برای تأیید اختصاصی بودن نتایج به‌دست‌آمده، واکنش هم با تشخیص «تجربی» گلبول‌های قرمز (یعنی گلبول‌های قرمز حساس شده با آنتی‌ژن یا آنتی‌بادی‌ها) و هم با یک تشخیص «کنترل» (یعنی گلبول‌های قرمز با آنتی‌ژن یا آنتی ژن حساس نمی‌شوند) انجام می‌شود. آنتی بادی ها). وجود واکنش مثبت با داروی تشخیصی "کنترل" نشان دهنده واکنش مثبت کاذب است. برای حذف واکنش های غیر اختصاصی، سرم آزمایش با گلبول های قرمز غیر حساس درمان می شود. یک پیش نیاز برای انجام RNGA یک واکنش خنثی سازی است، یعنی یک تست تایید.

در مقایسه با روش هایی مانند RPG، VIEF و RSK، واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم حساسیت بالاتری (200-400 برابر) دارد. بنابراین، HBsAg در RPHA را می توان در غلظت های 6-10 نانوگرم در میلی لیتر تشخیص داد. سادگی واکنش و سرعت (30-20 دقیقه) استفاده گسترده از این روش در سرویس انتقال خون برای تشخیص HBsAg را تعیین کرد.

علاوه بر تشخیص گلبول های قرمز برای تشخیص HBsAg و anti-HBs، آماده سازی های تشخیصی برای تشخیص anti-HBc، ضد HBc کلاس IgM (نوع فاز جامد)، HBeAg، آنتی ژن ویروس هپاتیت A و آنتی بادی های آن ایجاد شده است. همه آنها در مراقبت های بهداشتی عملی کاربرد پیدا نکرده اند.