Reaktsiya sinov materialida patogenlarning antijenlarini aniqlash uchun unga immun zardobini qo'shish orqali amalga oshiriladi. Gomologik antigen mavjud bo'lganda, antikorlarning bog'lanishi sodir bo'ladi, shuning uchun antigen bilan sensibilizatsiyalangan eritrotsitlar qo'shilgandan so'ng, ularning aglutinatsiyasi sodir bo'lmaydi, bu ijobiy natija sifatida baholanadi. Reaksiyaning yuqori sezuvchanligi uchun sinov materialiga minimal miqdorda (2 gemagglyutinatsiya birligi) o'ziga xos immun zardobi qo'shiladi. Immun zardobining titri avval RNGA yordamida aniqlanadi. Bitta gemagglyutinatsiya qiluvchi birlik uchun sarumning chegaraviy suyultirilishi olinadi, bu eritrotsitlarning yopishishini keltirib chiqaradi.

Metodologiya. Polistirol plitalari yoki aglyutinatsiya naychalari quduqlariga oddiy quyon zardobining 0,025 ml 1% eritmasi qo'shiladi va sinov materialining ketma-ket 2 marta suyultirilishi qilinadi. Keyin barcha quduqlarga 0,025 ml immun zardobi qo'shiladi, plastinka chayqatiladi va 37 ° C da 30 daqiqa yoki xona haroratida 1 soat davomida qoldiriladi. Keyin barcha quduqlarga 0,025 ml antigen diagnostikum qo'shiladi, chayqatiladi va 2 soatga qoldiriladi, shundan so'ng natijalar hisobga olinadi.

Ushbu reaksiyani amalga oshirishda immun zardobning o'ziga xosligini nazorat qilish RNGA uchun nazoratga qo'shiladi, u o'ziga xos antigen, immun zardobi (2, 1, 0,5 gemagglyutinatsiya birligi) va sensibilizatsiyalangan eritrotsitlar suspenziyasidan iborat.

RTNGA, shuningdek, o'ziga xos antikorlarni (to'liq va blokirovka qiluvchi) aniqlash uchun ishlatiladi, buning uchun test zardobiga dozalangan miqdorda antigen qo'shiladi. Agar u antikorlarni o'z ichiga olsa, u holda ularning antijeni bog'lanadi, shuning uchun antikorlar bilan sensibilizatsiyalangan eritrotsitlarni qo'shgandan so'ng (RTNGA ning 2-bosqichi) eritrotsitlar bir-biriga yopishmaydi.

Antigenning minimal miqdori (2 neytrallashtiruvchi doza) qo'llanilishi tufayli reaktsiya juda sezgir. Antigen preparatidagi neytrallashtiruvchi dozalar soni RNGA yordamida aniqlanadi, antigenning ketma-ket 2 marta suyultirilishi oddiy quyon zardobining 1% li eritmasida amalga oshiriladi va quduqlarga antikor eritrotsit diagnostikum kiritiladi. Antigenning neytrallashtiruvchi dozasi uning maksimal suyultirilishi hisoblanadi, bu esa sensibilizatsiyalangan eritrotsitlarning to'liq yopishishini ta'minlaydi.

Reaksiyadan oldin sinovdan o'tgan sarumlar 1: 5-1: 10 nisbatda suyultiriladi va 56 ° C haroratda 30 daqiqa davomida inaktiv qilinadi. Gemagglyutininlarning adsorbsiyasi uchun 1 ml suyultirilgan sarumga 0,1 ml suspenziya hisobiga qo‘chqorning formalinlangan yoki yangi yuvilgan eritrotsitlarining 50% suspenziyasi qo‘shiladi. Aralash chayqatiladi va 37 ° C da 30 daqiqa yoki xona haroratida 1 soat davomida inkübe qilinadi, shundan so'ng eritrotsitlar santrifüj orqali cho'ktiriladi. Ertasi kungacha eritrotsitlarni cho'ktirish uchun zardobni muzlatgichda qoldirish mumkin.

Tajriba davomida tekshirilayotgan material oddiy quyon zardobining 1% li eritmasida 0,025 ml hajmdagi mikrotitr paneli quduqlarida suyultiriladi. Keyin har bir quduqqa 0,025 ml hajmdagi antigenning 2 neytrallashtiruvchi dozasi qo'shiladi. Plitalar chayqatiladi va 30 daqiqa davomida 37 ° C da yoki xona haroratida 1 soat davomida qoldiriladi. Keyin, barcha quduqlarga 0,025 ml antikor eritrotsit diagnostikum qo'shiladi. Plitalar chayqatiladi va xona haroratida 1,5-2 soat davomida inkubatsiya qilinadi, shundan so'ng reaktsiya natijalari hisobga olinadi. Buxgalteriya hisobi keyingi kun ham amalga oshirilishi mumkin. Sinov zardobining titri uning maksimal suyultirilishi hisoblanadi, bunda eritrotsitlarning yopishishi yo'q.

Tajriba quyidagi nazorat turlari bilan birga keladi:

1) sensibilizatsiyalangan eritrotsitlarning barqarorligi (eritrositlar +1% oddiy quyon zardobining eritmasi);

2) har bir tekshiriluvchi zardobda gemagglyutininlarning kamayishi to'liqligi (eng past suyultirilganda sinov zardobi + rasmiylashtirilgan eritrotsitlar);

3) antigenning minimal neytrallashtiruvchi dozasini aniqlashning to'g'riligi (antigenning 2, 1 va 0,5 neytrallash dozalari + antikor eritrotsit diagnostikum).

Teskari aloqa reaktsiyasi bilvosita gemagglyutinatsiya(ronga) sinov materiallarida bakterial va virusli antijenlarni ko'rsatish, shuningdek, bir qator infektsiyalarni ekspress diagnostika qilish uchun ishlatiladi.

RNGA dan farqli o'laroq, bu reaktsiyada eritrotsitlar antigen bilan emas, balki antijen qo'shilganda aglyutinatsiya sodir bo'lgan antikorlar bilan sezgirlanadi.

Eritrositlar oldindan formalin yoki glutaraldegid bilan mahkamlanadi, so'ngra ularni immun zardobdan ajratilgan va boshqa zardob oqsillaridan tozalangan gamma-globulin bilan bog'laydi. Gamma-globulinning eritrotsitlar yuzasiga bog'lanishi xrom xlorid yordamida sodir bo'ladi. Buning uchun 8 hajm distillangan suvga immun zardobdan ajratilgan 1 hajm immunoglobulinlar, 1 hajm formalinlashgan eritrotsitlarning 50% li suspenziyasi va 1 hajm 0,1-0,2% li xrom xlorid eritmasi qo‘shiladi. Aralash xona haroratida 10-15 daqiqaga qoldiriladi, so'ngra eritrotsitlar passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasi kabi davolanadi.

Antikor diagnostikumining o'ziga xosligi homolog antigen tomonidan passiv gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasida tekshiriladi. Reaksiya gomologik antigen tomonidan kamida 16 marta inhibe qilinishi kerak va heterolog tomonidan inhibe qilinmasligi kerak. Spontan gemagglyutinatsiyaning yo'qligi uchun nazorat qo'llaniladi.

Ushbu reaktsiya yordamida o'lik odamlar va hayvonlarning organlaridan, masalan, miya, taloq, o'pka jigaridan olingan materialda patogenlarning ko'rsatkichi amalga oshiriladi. Bu organlarning 10% li suspenziyasini natriy xloridning izotonik eritmasida tayyorlang, ularni 10 000 aylanish tezligida 30-60 daqiqa davomida sentrifuga qiling va supernatantni antigen sifatida ishlating.

Metodologiya. Stabillashtiruvchi eritmada tekshiriladigan materialning (antigen) 2 marta suyultirilishini tayyorlang. Mikropanelning 3 ta qo'shni qudug'iga har bir antigen suyultirilganidan 1 tomchi qo'shing (reaksiya 3 ta parallel qator quduqlarni oladi). Birinchi qatorning har bir qudug'iga 1 tomchi stabilizator eritmasidan, ikkinchi qator quduqlariga 1 tomchi gomologik immun zardobdan 1: 10 nisbatda suyultirilganda, uchinchi qatorga 1 tomchi geterologik immun zardobdan qo'shing. Ikkinchi va uchinchi qatorlar javobning o'ziga xosligini nazorat qilish vazifasini bajaradi. Aralash xona haroratida 20 daqiqaga qoldiriladi.

Barcha quduqlarga sensibilizatsiyalangan eritrotsitlarning 1% li suspenziyasidan 1 tomchi qo'shing (eritrosit antikor diagnostikum) va plastinkalarni yaxshilab silkiting. Reaktsiya natijalari 30-40 daqiqadan so'ng hisobga olinadi. O'ziga xos antigen mavjud bo'lganda, gemagglyutinatsiya birinchi va uchinchi qatorda (heterolog sarum bilan) qayd etiladi va ikkinchi qatorda yo'q, bu erda antigen ilgari gomologik sarum bilan neytrallanadi.

Reaktsiya o'z-o'zidan aglutinatsiya uchun sensibilizatsiyalangan eritrotsitlarni nazorat qilish bilan birga keladi.

Teskari bilvosita gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasi (RTONGA) odam va hayvonlar zardobida antitellar mavjudligini aniqlash imkonini beradi.

Metodologiya. Sarumlar natriy xloridning izotonik eritmasi bilan 10 marta suyultiriladi, nonspesifik ingibitorlarni yo'q qilish uchun 20 daqiqa davomida 65 ° C da isitiladi, so'ngra zardobning 2 marta suyultirilishi stabillashtiruvchi eritmada va 4 ta aglyutinatsiya birligini o'z ichiga olgan antigenning ishchi dozasida tayyorlanadi. Mikropanel quduqlariga har bir zardob suyultirmasidan 1 tomchi qo'shing va ularga 1 tomchi antigen qo'shing, ularning suyultirilishi ishchi dozaga to'g'ri keladi. Aralashmaning tarkibiy qismlari xona haroratida 20 daqiqa davomida aloqa qilgandan so'ng, barcha quduqlarga 1 tomchi eritrotsit antikor diagnostikum qo'shiladi va yaxshilab chayqatiladi. Xona haroratida 1,5-2 soat inkubatsiyadan so'ng, reaksiya natijalari gemagglyutinatsiya yo'li bilan hisobga olinadi. Sarumning titri uning eng katta suyultirilishi bo'lib, u to'rtta aglutinatsiya qiluvchi antigen birliklari bilan gemagglyutinatsiya reaktsiyasini to'liq inhibe qiladi.

Reaksiya sensibilizatsiyalangan eritrotsitlarni o'z-o'zidan aglutinatsiya uchun nazorat qilish bilan birga keladi: a) barqarorlashtiruvchi eritma; b) normal antigen (tarkibida virus bo'lmagan materialdan); c) sinov sarumi. Reaksiyaning afzalligi uning ko'p qirraliligi va uni turli antigenlarni aniqlash uchun ishlatish imkoniyatidir.

Gemagglyutinatsiya natijalarini baholash. RNGA, RONGA va RTONGA natijalari eritrotsitlarning aglutinatsiya darajasiga ko'ra hisobga olinadi: (++++) - to'liq aglutinatsiya; (+++) - kamroq to'liq aglutinatsiya; (++) - qisman aglutinatsiya; (+) - aglutinatsiya izlari; (-) - aglutinatsiya yo'q.

Agglyutinatsiya to'liq (++++) yoki deyarli to'liq (+++) bo'lsa, diagnostikum reaksiyaning har bir komponenti ishtirokida o'z-o'zidan aglutinatsiyani bermasa va reaktsiyaning o'ziga xosligini nazorat qilsa, reaktsiya ijobiy hisoblanadi. antigen yoki antikor musbat.

Bilvosita yoki passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (RNGA yoki RPHA) aglutinatsiya reaktsiyasiga qaraganda sezgirroq va o'ziga xosdir. Bu reaksiya ikki usulda ham qo'llaniladi.

1) Bemorning qon zardobida antikorlarni aniqlash uchun eritrotsit diagnostikasi qo'llaniladi, bunda antigen tanin bilan ishlangan eritrotsitlar yuzasida adsorbsiyalanadi. Ushbu reaktsiyaga nisbatan RPHA atamasi ko'pincha ishlatiladi.

Sinov sarumi plastik plitalarning quduqlarida suyultiriladi va eritrotsit diagnostikum qo'shiladi. Ijobiy reaktsiya bilan, teshikning devorlari bo'ylab "dantelli soyabon" shaklida nozik bir plyonka paydo bo'ladi, salbiy reaktsiya bilan - "tugma" shaklida eritrotsitlarning zich cho'kindi.

2) Toksinlarni aniqlash va bakterial antijenler Sinov materialida eritrotsitlarga antikorlarning adsorbsiyasi natijasida olingan antikor eritrotsit diagnostikasi qo'llaniladi. Ushbu reaktsiyaga nisbatan RNGA atamasi tez-tez ishlatiladi. Masalan, vabo tayoqchasining antigeni, difteriya ekzotoksini, botulinum ekzotoksini antitel diagnostikasi yordamida aniqlanadi.

Kumbs reaktsiyasi (aptiglobulin testi)

Reaktsiya to'liq bo'lmagan antikorlarni, masalan, Rh omiliga antikorlarni aniqlash uchun ishlatiladi. Rh + eritrotsitlarga test zardobi qo'shiladi, unda Rh omiliga to'liq bo'lmagan antikorlarning mavjudligi taxmin qilinadi. Eritrotsitlarga biriktirilgan to'liq bo'lmagan antikorlar aglutinatsiyaga olib kelmaydi, chunki ular faqat bitta faol markazga ega. Keyin inson globulinlariga antikorlarni o'z ichiga olgan antiglobulin sarum qo'shing. To'liq bo'lmagan antikorlar bilan birlashganda, antiglobulin sarum eritrotsitlarning aglutinatsiyasini keltirib chiqaradi.

Yog'ingarchilik reaktsiyasi

Reaksiyaning mohiyati o'ziga xos antikorlar ta'sirida antigenning cho'kishi (cho'kishi). Ko'rinadigan reaktsiyani olish uchun elektrolitning mavjudligi kerak. Cho'kma reaktsiyasida antijen molekulyar tarqalgan moddalardir.

Halqali yog'ingarchilik reaktsiyasi tor yog'ingarchilik quvurlariga joylashtirilgan. Immun zardobi probirkaga quyiladi, uning ustiga tekshiriluvchi material ehtiyotkorlik bilan qatlamlanadi. Unda antigen mavjud bo'lganda, ikkita suyuqlik chegarasida shaffof bo'lmagan cho'kma halqasi hosil bo'ladi.

Reaktsiya sud tibbiyotida oqsillarning turlarini aniqlash uchun ishlatiladi qon dog'lari, spermada va boshqalar; kuydirgi (Ascoli reaktsiyasi), meningit va boshqa infektsiyalar tashxisida antigenni aniqlash; sanitariya-gigiyena tadqiqotlarida - qalbakilashtirishni o'rnatish oziq-ovqat mahsulotlari... Immunitetni cho'ktiruvchi sarumlar hayvonlarni tegishli antigen bilan immunizatsiya qilish orqali olinadi. Masalan, odam oqsilini cho'ktiruvchi sarum quyonni inson oqsili bilan immunizatsiya qilish orqali olinadi. Cho'kma zardobining titri antigenning eng katta suyultirilishi bo'lib, u bilan reaksiyaga kirishadi. Sarum odatda suyultirilmagan yoki 1: 5 nisbatda suyultiriladi.

Agar gelning cho'ktirish reaktsiyasi bir qancha usullar bilan amalga oshiriladi. Bu er-xotin immunodiffuziya reaktsiyasi, radial immunodiffuziya reaktsiyasi, immunoelektroforez reaktsiyasi.

Ikki tomonlama immunodiffuziya reaktsiyasi(Ouchterloniga ko'ra). Eritilgan agar jeli Petri idishiga quyiladi va qotib qolgandan so'ng, unda quduqlar kesiladi. Antigen ba'zi quduqlarga joylashtiriladi, boshqalarida - agarga tarqaladigan immun zardoblari, uchrashish joyida oq chiziqlar shaklida cho'kma hosil qiladi.

Radial immunodiffuziya reaktsiyasi(Manchini bo'yicha). Immun sarum eritilgan agar jeliga qo'shiladi, idishga quyiladi. Agar qotib qolgandan so'ng, uning ichida quduqlar kesiladi va ularga antigenlar joylashtiriladi, ular agarga tarqalib, quduqlar atrofida halqali yog'ingarchilik zonalarini hosil qiladi. Antigen konsentratsiyasi qanchalik yuqori bo'lsa, halqa diametri shunchalik katta bo'ladi. Reaksiya, masalan, qondagi immunoglobulinlarning turli sinflarini aniqlash uchun ishlatiladi. IgG, IgM, IgA sinflarining immunoglobulinlari bu reaksiyada antijen sifatida harakat qiladi va ularga qarshi antitellar o'ziga xos monoretseptor sarumlarida bo'ladi.

Immunoelektroforez. Protein antijenlarining elektroforezi agar jelida amalga oshiriladi. Oqsillarning harakat yo'nalishiga parallel ravishda o'tadigan chuqurchaga cho'ktiruvchi sarum kiritiladi. Agarda antigenlar va antitellar tarqaladi va yig'ilish joyida yog'ingarchilik chiziqlari hosil bo'ladi.

Immun lizis reaktsiyalari

Antigen (eritrositlar yoki bakteriyalar) o'ziga xos antikorlar bilan birlashganda, immun kompleksini hosil qiladi, unga komplement (C1) biriktiriladi va komplement klassik yo'l bilan faollashadi. Faollashgan komplement qizil qon tanachalarini (gemoliz) yoki bakteriyalarni (bakterioliz) parchalaydi. Vibrion vabolarini aniqlash uchun bakterioliz reaksiyasidan foydalaniladi.

Gemoliz reaktsiyasi. Reaksiyadagi antijen eritrotsitlar, antikorlar (gemolizinlar) gemolitik sarumda mavjud. Gemolizinlar qizil qon tanachalariga birikadi, qizil qon hujayralarini parchalaydigan komplement faollashadi. Eritrositlarning bulutli suspenziyasi shaffof yorqin qizil suyuqlikka aylanadi - "lak qon". Gemoliz reaktsiyasi faqat komplement ishtirokida sodir bo'lganligi sababli, u komplementni aniqlash uchun indikator sifatida ishlatiladi.

Jeldagi mahalliy gemoliz reaktsiyasi(Erne reaksiyasi) - gemoliz reaksiyasining varianti. Taloq va limfa tugunlarida antikor ishlab chiqaruvchi hujayralar (AOC) sonini aniqlash uchun xizmat qiladi.

Eritilgan agar geli taloq hujayralari va eritrotsitlar suspenziyasi bilan aralashtiriladi va agar qotib qolgandan keyin komplement qo'shiladi. Har bir gemolizin ishlab chiqaruvchi hujayra atrofida gemoliz zonasi hosil bo'ladi. Bunday zonalar soni gemolizin ishlab chiqaruvchi hujayralar sonini aniqlash uchun ishlatiladi.

Mavzu mazmuni "Immunomodulyatorlar. Immunodiagnostika yuqumli kasalliklar.":

Kengaytirilgan aglutinatsiya reaktsiyasi (RA). Bemorning qon zardobida AT ni aniqlash uchun qo'ying kengaytirilgan aglutinatsiya reaktsiyasi (RA)... Buning uchun qon zardobini suyultirish seriyasiga diagnostik qo'shiladi - o'ldirilgan mikroorganizmlar yoki adsorbsiyalangan Ag bilan zarrachalar suspenziyasi. Maksimal suyultirish aglutinatsiya Ag sarum titri deb ataladi.

Agglyutinatsiya reaksiyasining turlari (RA) AT ni aniqlash uchun - tulyaremiya (bir tomchi qonga diagnostik qo'llash va ko'rinadigan oqartiruvchi aglyutinatlar paydo bo'lishi bilan) va brutsellyozga Xedlsonning reaktsiyasi (bir tomchiga gentian binafsha rang bilan bo'yalgan diagnostikni qo'llash bilan) uchun qon tomchisi testi. qon zardobi).

Indikativ aglutinatsiya reaktsiyasi (RA)

Izolyatsiya qilingan mikroorganizmlarni aniqlash uchun slaydlarga taxminiy RA qo'ying. Buning uchun qo'zg'atuvchining madaniyati standart diagnostik antiserumning bir tomchisiga qo'shiladi (suyultirish 1:10, 1:20). Natija ijobiy bo'lsa, antiserumning ko'payishi bilan batafsil reaktsiya o'rnatiladi.

Reaktsiya diagnostik sarum titriga yaqin suyultirishlarda aglyutinatsiya kuzatilsa, ijobiy hisoblanadi.

OAS. Somatik O-Ag termik barqaror va 2 soat qaynashga chiday oladi.AT bilan oʻzaro taʼsirlashganda mayda donador agregatlar hosil qiladi.

H-Ag. H-Ag (flagellate) termolabildir va 100 ° C da, shuningdek, etanol ta'sirida tezda buziladi. H-antiserum bilan reaksiyalarda, 2 soatlik inkubatsiyadan so'ng, bo'shashgan katta bo'laklar hosil bo'ladi (bakteriyalar flagellalarni bir-biriga yopishtiradi).

Vi-Ar tif bakteriyasi nisbatan termostabildir (2 soat davomida 60-62 ° S haroratga bardosh beradi); Vi-antiserum bilan inkubatsiya qilinganda, mayda donador aglyutinat hosil bo'ladi.

To'g'ridan-to'g'ri gemagglyutinatsiya reaktsiyalari

Bularning eng oddiylari reaktsiyalar - aglutinatsiya AB0 tizimidagi qon guruhlarini aniqlash uchun ishlatiladigan eritrotsitlar yoki gemagglyutinatsiya. Aniqlash uchun aglutinatsiya(yoki uning etishmasligi) anti-A va anti-B-aglutininlar bilan standart antiserumlar yordamida. Reaksiya to'g'ridan-to'g'ri deyiladi, chunki tekshirilgan Ag eritrotsitlarning tabiiy komponentlari hisoblanadi.

bilan umumiy bevosita gemagglyutinatsiya mexanizmlar virusli gemagglyutinatsiyaga ega. Ko'pgina viruslar qushlar va sutemizuvchilarning eritrotsitlarini o'z-o'zidan aglutinatsiya qilishga qodir, ularning eritrotsitlar suspenziyasiga qo'shilishi ulardan agregatlar hosil bo'lishiga olib keladi.

Sayt faqat ma'lumot olish uchun fon ma'lumotlarini taqdim etadi. Kasalliklarni tashxislash va davolash mutaxassisning nazorati ostida amalga oshirilishi kerak. Barcha dorilar kontrendikatsiyaga ega. Mutaxassis maslahati talab qilinadi!

Serologik qon analizi yo‘lidir laboratoriya tadqiqoti ba'zi antijenler yoki antikorlar ( maxsus oqsillar) bemorning qon zardobida, tananing immunitet reaktsiyalariga asoslangan. Bu usul qachon qo'llaniladi diagnostika yuqumli kasalliklar bemorning qonida ma'lum turdagi viruslar yoki bakteriyalarga antikorlar mavjudligini aniqlash, shuningdek, qonning guruhga tegishliligini aniqlash.

O'quv materiali

Serologik tahlil uchun birinchi navbatda bemordan olingan biologik material qo'llaniladi:

• qon zardobi
• tupurik
• najas moddasi

Ba'zi hollarda ma'lum atrof-muhit ob'ektlaridan ajratilgan material tekshiriladi:

• tuproq

Tahlil qilish yoki qon namunalarini olish usuli

Ushbu tahlil bemorning maxsus tayyorgarligini talab qilmaydi. Qon namunasi ertalab och qoringa o'tkaziladi va umumiy qabul qilingan gematologik usullar bo'yicha tibbiyot muassasalarining davolash xonalarida amalga oshiriladi. Serologik tekshirish uchun qon ikki usulda olinadi: venoz qon bemorning dirsek venasidan olinadi va kapillyar qon olinadi. halqa barmoq... Qon steril muhrlangan naychalarga joylashtiriladi.

Qonni tashish va sarumni saqlash xususiyatlari

Qon olingandan so'ng darhol maxsus laboratoriyaga olib boriladi, u erda sarum o'sha kuni tayyorlanadi. Zardobni muzlatgichda 2 - 4 daraja haroratda 4 - 6 kundan ortiq bo'lmagan saqlashga ruxsat beriladi. Agar uzoqroq saqlash kerak bo'lsa, sarum muzlatiladi. Zardob sifatini buzmaslik uchun uni bir marta muzlatish va shunga mos ravishda eritishga ruxsat beriladi. Uzoq muddatli saqlash bilan antikorlar o'z xususiyatlarini yo'qotadi va qisman faol bo'lmaydi, muzlashga eng sezgir bo'lganlar sinfning immunoglobulinlaridir. M... Sarumni eritib bo'lgach, uni bir hil massaga qadar yaxshilab aralashtirish kerak, bu esa ushbu sarum tarkibidagi antikorlarning kontsentratsiyasini tiklashga yordam beradi.

Serologiya nima uchun ishlatiladi?

Serologik usullar laboratoriya diagnostikasi kabi kasalliklarni aniqlashda foydalaniladi echinokokkoz, trixinoz, toksokaroz, opistorxoz, tsisterkoz, toksoplazmoz, amebiaz, lyamblioz, davolash kursining samaradorligini aniqlash va nihoyat, bemor to'liq tuzalib ketganidan keyin kasallikning qaytalanishini aniqlash.

Serologik diagnostikaning asosiy usullari

Immunofloressensiya reaktsiyasi (RIF)

Bu reaktsiya serologik tadqiqotning bilvosita versiyasidir, ya'ni u ikki bosqichda amalga oshiriladi. Birinchi bosqichda antiglobulin yordamida aylanma antigen-antikor kompleksida kerakli antikor aniqlanadi, bu immunitet zardobidagi oqsillarga o'xshash tuzilishga ega. Kerakli antikorni aniqlash antiglobulinlardan foydalanmasdan, luminesans mikroskop ostida oldindan tayyorlangan antijenik preparatni o'rganishda ham mumkin.

Immunofloresan reaktsiyasi juda ko'p vaqt talab qiladigan jarayon bo'lib, mutaxassisdan ko'p vaqt va mas'uliyat talab qiladi. Reaktsiya eritmalar tayyorlashdan boshlanadi, so'ngra sarum va ularning nazorat namunalari titrlanadi ( tekshiriluvchi eritmani nazorat qilinadigan reagent miqdori bilan asta-sekin aralashtirish orqali ma'lum bir moddaning tarkibini aniqlash imkonini beruvchi jarayon). Oldindan tayyorlangan suyultirishlar va ularning nazorat namunalari antigen bilan slaydlarga ehtiyotkorlik bilan qo'llaniladi. Keyin preparatlar inkubatsiya qilinadi, keyin yuviladi va havo bilan quritiladi. Yupqa qatlamda antijeni bo'lgan ko'zoynaklarga antiserum qo'llaniladi, shundan so'ng preparatlarning ikkilamchi inkubatsiyasi amalga oshiriladi va preparatni quritish bilan tugaydigan barcha oldingi harakatlar zanjiri takrorlanadi. Natijada, shisha slayddagi preparat glitserin bilan ishlanadi va floresan mikroskop ostida tekshiriladi.

O'tkazilgan reaktsiya natijalari to'rt balli shkala bo'yicha baholanadi, bu antigen hujayralarining sirt sariq-yashil porlashining intensivligi bilan tavsiflanadi:
+ hujayraning juda zaif porlashi, faqat uning chetida seziladi
++ hujayra periferiyasining zaif lyuminesansiyasi, ammo aniq sezilarli yashil rang bilan
+++/++++ hujayra periferiyasining yorqin yashil porlashi
Reaksiya titri zardobning shunday suyultirilishi deb hisoblanadi, bunda antigen hujayralarining kamida 50 foizi aniq sirt porlashini namoyon qiladi, ya'ni reaksiya natijasidir. +++ yoki ++++ ... Reaktsiya diapazoni 1/80 dan 1/100 gacha.

Reaksiyaning intensivligi hosil bo'lgan quduqlar tubida cho'kma eritrotsitlar soniga bog'liq:
– salbiy reaktsiya, bu eritrotsitlarning quduqlar tubida silliq qirralari yoki "tugmalari" bo'lgan kichik halqa shaklida cho'kishi bilan tavsiflanadi.
+ past intensivlik, bu reaktsiya teshikning pastki qismida kichik bitta konlar bilan tavsiflanadi. Agglyutinlanmagan qizil qon tanachalari teshik markazida "kichik halqa" hosil qiladi
++ o'rtacha intensivlik, quduq tubida aglyutinlanmagan eritrotsitlarning "keng zich halqasi" shakllanishi bilan tavsiflanadi.
+++ qizg'in reaktsiya, aglutinatsiyalangan eritrotsitlar "soyabon" deb ataladigan narsalarni hosil qiladi, ularning markazida joylashgan aglyutinlanmagan eritrotsitlar tomonidan hosil bo'lgan halqalar aniq ko'rinadi.
++++ keskin qizg'in reaktsiya, unda barcha eritrotsitlar aglutinatsiyalanadi va "soyabonlar" hosil bo'lib, quduqlarning pastki qismini qoplaydi.
Ushbu reaktsiyaning titri sarumning oxirgi suyultirilishi hisoblanadi, bunda eritrotsitlarning aniq aglutinatsiyasi aniqlanadi. +++ , ya'ni kuchli yoki keskin kuchli reaktsiya bilan.

Serologik diagnostika usullarining ishonchliligi va sifati tahlil natijalari sifatini baholash uchun mo'ljallangan bir nechta mustaqil protseduralardan iborat ichki va tashqi laboratoriya nazoratini tashkil etishga bog'liq.

Bilvosita GEMAGGLUTINATION REAKSIYASI, RNGA
(Bilvosita gemagglyutinatsiya testi)

Antijen va antikorlarni aniqlash usuli, antijen yoki antitellar yuzasida ilgari adsorbsiyalangan eritrotsitlarning gomologik zardoblar yoki tegishli antijenler ishtirokida aglyutinatsiya qilish qobiliyatiga asoslangan.

Antigenlar aniqlanganda reaktsiya teskari passiv gemagglyutinatsiya - ROPHA (teskari passiv gemagglyutinatsiya testi), antikorlar aniqlanganda - passiv gemagglyutinatsiya - RPHA (passiv gemagglyutinatsiya testi) bilan ko'rsatiladi. RNGA gepatit B virusi infektsiyasining serologik markerlarini, ayniqsa HBsAg va unga antikorlarni aniqlash uchun keng qo'llanilishini topdi.

Hozirgi vaqtda eritrotsitlarni sensibilizatsiya qilish usullari (tanin, glutaraldegid, xrom xlorid, rivanol va boshqalar), ularning turlari (odam, qo'chqor, tovuq, kurka va boshqalar) bilan farq qiluvchi eritrotsit diagnostikumlarini ishlab chiqarish uchun turli xil usullar ishlab chiqilgan. . ), reaktsiyani o'rnatish variantlari (mikrotitrli plastinkalarda, probirkalarda, kapillyarlarda va hokazo) va natijalarni qayd etish (vizual va instrumental). HBsAg va anti-HB ni aniqlash uchun eritrotsit diagnostikasi mamlakatimizda ham, xorijda ham ko'plab korxonalar va firmalar tomonidan ishlab chiqariladi.

Ko'pincha RNGA mikrotiter plitalarida amalga oshiriladi, unda sinov sarumining suyultirilishi va nazorat namunalari oldindan tayyorlanadi. Eritrosit diagnostikasi va inkubatsiyasi kiritilgandan so'ng, reaktsiya natijalari qayd etiladi. Inverted "soyabon" kabi ko'rinadigan eritrotsitlarning aglutinatsiyasi ijobiy deb hisoblanadigan namunalar. Salbiy reaktsiya bo'lsa, eritrotsitlar halqa yoki disk shaklida quduq tubiga joylashadi.

Olingan natijalarning o'ziga xosligini tasdiqlash uchun reaktsiya "eksperimental" eritrotsit diagnostikum (ya'ni, antigen yoki antikorlar bilan sensibilizatsiyalangan eritrotsitlar) va "nazorat" diagnostikum (ya'ni, eritrotsitlar antigen yoki antikor bilan sensibilizatsiya qilinmaydi) bilan amalga oshiriladi. antikorlar). "Nazorat" diagnostik preparati bilan ijobiy reaktsiyaning mavjudligi noto'g'ri ijobiy reaktsiyani ko'rsatadi. Nonspesifik reaktsiyalarni bartaraf qilish uchun sinov sarumiga sezgir bo'lmagan eritrotsitlar bilan ishlov beriladi. RNGA ni bajarish uchun zaruriy shart neytrallash reaktsiyasi, ya'ni tasdiqlash testidir.

RPG, VIEF va RSK kabi usullar bilan solishtirganda bilvosita gemagglyutinatsiya reaktsiyasi yuqori sezuvchanlikka ega (200-400 marta). Shunday qilib, RPHAdagi HBsAg 6-10 ng / ml konsentratsiyalarda aniqlanishi mumkin. Reaksiyaning soddaligi va tezligi (20-30 daqiqa) HBsAg ni aniqlash uchun qon quyish xizmatida ushbu usulning keng qo'llanilishini aniqladi.

HBsAg va anti-HBs ni aniqlash uchun eritrotsit diagnostikasidan tashqari, anti-HBc, anti-HBc sinf IgM (qattiq fazali variant), HBeAg, gepatit A virusi antijeni va unga antikorlarni aniqlash uchun diagnostika preparatlari ishlab chiqilgan. , ularning barchasi amaliy sog'liqni saqlashda qo'llanilmagan.