Реклама на портале

Антинуклеарные ат кол igg. Для чего определяют антинуклеарные антитела? Системные заболевания соединительной ткани

Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2 (АНФ) - это тест для выявления антинуклеарных антител методом непрямой иммунофлюоресценции.

При системной красной волчанке (СКВ) и других системных ревматических заболеваниях, иммунный ответ направлен против нуклеопротеиновых антигенов, т.е. комплексов нуклеиновых кислот и белков. Эти эндогенные нуклеопротеиновые комплексы образуются в ходе процесса апоптоза эпителиоцитов и напоминают чужеродные вирусные частицы. Ускорение процессов апоптоза под действием ультрафиолетового облучения, вирусных инфекций и лекарственных препаратов, запускает аутоиммунные ответы при СКВ. При апоптозе основные антигены антител конденсируются в апоптотических тельцах, которые становятся мишенью для аутоантител. В настоящее время описаны около 200 разновидностей антител к нуклеопротеинам и рибонуклеиновым кислотам, которые получили название антинуклеарные антитела. При аутоиммунных заболеваниях аутоантитела к ядерным антигенам не обладают прямым цитотоксическим действием на клетки человека, однако иммунные комплексы способны запускать иммунологическое воспаление особенно в местах, где сосуды особенно тонки, в том числе в почках, коже, ЦНС, синовиальной оболочке суставов, плевре.

Исследование антинуклеарного фактора (АНФ) представляет собой основной метод выявления антинуклеарных антител, позволяя выявлять аутоантитела к нуклеиновым кислотам (дсДНК, осДНК, РНК), рибонуклеопротеинам, а также большинству конформационных и нерастворимых антигенов.

Антинуклеарные антитела обнаруживаются благодаря их связыванию с внутриклеточными антигенами перевиваемой линии клеток эпителия человека (HEp-2). Ядро и цитоплазма клеток НЕр-2 содержит все антигены, характерные для человеческого организма, что позволяет выявлять в одном тесте все основные антинуклеарные антитела. Метод непрямой иммунофлюоресценции на клеточной линии НЕр2 рекомендован в качестве золотого стандарта выявления антинуклеарных антител ведущими европейскими (EASIgroup2010) и американскими экспертами (ACRANATaskforce2008). В силу многообразия антигенов антинуклеарных антител, не все они могут быть очищены или синтезированы для использования в иммуноферментных тестах по выявлению антинуклеарных антител.

Позитивность по АНФ на клеточной линии НЕр-2 отмечается при системной красной волчанке (СКВ), системных ревматических заболеваниях и многих аутоиммунных заболеваниях, что делает его универсальным тестом в обследовании больных с аутоиммунной патологией. Положительный результат АНФ отмечается более чем у 90% больных с диффузными болезнями соединительной ткани, такими как системная красная волчанка и кожные формы этого заболевания, склеродермия и ее разновидности, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шегрена. Выявление АНФ имеет большое значение в диагностике ювенильного ревматоидного артрита и аутоиммунных заболеваний печени. Представители этого семейства аутоантител могут быть обнаружены при множестве других аутоиммунных (тиреоидит, диабет), инфекционных (вирусный гепатит), воспалительных и онкологических заболеваний. Встречаемость АНФ достигает 1–3% у клинически здоровых людей и несколько возрастает у лиц старше 65 лет. Лица с высокими титрами АНФ имеют повышенный риск развития аутоиммунных заболеваний.

Показания:

  • Системная красная волчанка.
  • Подострая кожная волчанка и другие разновидности кожной волчанки.
  • Смешанное заболевание соединительной ткани.
  • Синдром Шегрена и ассоциированные заболевания.
  • Диффузная и локализованная склеродермия, CREST-синдром.
  • Воспалительные миопатии (полимиозит и дерматомиозит).
  • Ювенильный хронический артрит.
  • Аутоиммунный гепатит.
  • Первичный билиарный цирроз и склерозирующий холангит.
  • Полинейропатии и миелит.
Подготовка


Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак или спустя 4–6 часов после последнего приема пищи. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Единицы измерения: титр.

Референсные значения: <1:160 (отрицательно).

Результатом определения АНФ является титр, представляющий собой значение конечного разведения сыворотки при котором сохраняется значимая флюоресценция ядра. Чем выше знаменатель дроби, тем больше разведение сыворотки, тем больше антител в сыворотке больного. Высокие титры разведения сыворотки отражают высокую аффинность и концентрацию аутоантител.

Выявление высоких тиров (1/640 и выше) указывает на высокую вероятность системного ревматического заболевания или аутоиммунного заболевания печени и требует внимательного клинического, лабораторного и инструментального обследования. Отсутствие повышенных титров антинуклеарного фактора значительно снижает вероятность системных аутоиммунных заболеваний.

В низких титрах (до 1/160) антинуклеарный фактор может отмечаться у 1–2% здоровых лиц и родственников больных с системными заболеваниями. Частота положительных титров в популяции несколько увеличивается с возрастом. Низкие титры антинуклеарных антител могут встречаться при многих аутоиммунных, инфекционных и онкологических заболеваниях. Отсутствие высоких титров антинуклеарных антител значительно снижает вероятность системного ревматического процесса и может использоваться скорее для исключения, чем подтверждения диагноза.

Синонимы: АНА, антинуклеарные антитела, антинуклеарный фактор, АНФ, антиядерные антитела, antinuclear antibodies, ANAs, Fluorescent Antinuclear Antibody, Antinuclear factor, ANF

Научный редактор: М. Меркушева, ПСПбГМУ им. акад. Павлова, лечебное дело.

Аутоиммунные заболевания, когда иммунная система атакует собственные ткани организма, считаются одними из самых опасных. Большинство аутоиммунных патологий относятся к хроническим и могут вызывать серьезные нарушения в работе внутренних органов и систем.

Одним из наиболее распространенных тестов, применяемых в диагностике аутоиммунных состояний, является обследование на антинуклеарные антитела (АНА), который проводится тремя способами:

  • методом иммуноферментного анализа ИФА (определяется общий уровень ANA),
  • методом реакции непрямой иммунофлуоресценции РНИФ (выявляется до 15 разновидностей ANA)
  • методом иммуноблоттинга.

Общие сведения

Антинуклеарные (антиядерные) антитела представляют собой группу аутоантител, которые, вступая в реакцию с ядрами собственных клеток организма, разрушают их. Поэтому анализ на АНА считается достаточно чувствительным маркером в диагностике именно аутоиммунных нарушений, большая часть из которых сопровождается поражением соединительной ткани. Однако некоторые из видов антинуклеарных антител обнаруживаются и при заболеваниях не иммунной этиологии: воспалительных, инфекционных, злокачественных и пр.

Наиболее специфичны антинуклеарные антитела к следующим заболеваниям:

  • системная красная волчанка (СКВ) – заболевание кожи и соединительной ткани;
  • дерматомиозит – поражение кожи, мышц, скелетной ткани и т.д.;
  • узелковый периартериит – воспаление артериальной сосудистой стенки;
  • склеродермия – уплотнение и затвердение соединительной ткани;
  • ревматоидный артрит – поражение соединительной ткани суставов;
  • болезнь Шегрена – поражение ткани с железистыми проявлениями (снижение секрета слезных и слюнных желез).

Антинуклеарные антитела могут обнаруживаться более чем у 1/3 больных хроническим рецидивирующим гепатитом. Также уровень АНА может возрастать в случае:

  • инфекционного мононуклеоза (вирусное заболевание, сопровождается массовым поражением внутренних органов);
  • лейкоза (злокачественное заболевание крови) в острой и хронической форме;
  • гемолитической анемии (малокровие в результате разрушения эритроцитов);
  • болезни Вальденстрема (поражение костного мозга);
  • цирроза печени (хроническое заболевание, связанное с изменением структуры печеночной ткани);
  • малярии;
  • лепры (инфекционное поражение кожи);
  • тромбоцитопении (снижение выработки тромбоцитов);
  • лимфопролиферативных патологий (опухоли лимфатической системы);
  • миастении (патологическая утомляемость мышц);
  • тимомы (опухоль из вилочковой железы).

Одновременно с определением антинуклеарных антител в процессе иммуноферментного анализа оценивается концентрация иммуноглобулинов: IgA , IgM , IgG . Обнаружение этих компонентов в крови может свидетельствовать о высокой вероятности развития ревматических заболеваний и коллагенозов.

В случае, когда связь между концентрацией антител и симптоматикой у больного не обнаруживается, само присутствие антиядерных антител в крови является диагностическим критерием и может повлиять на выбор лечения. Сохранение высокого уровня антинуклеарных антител при продолжительном курсе терапии свидетельствует о неблагоприятном прогнозе заболевания. Снижение значений АНА на фоне проводимого лечения может указывать на ремиссию (чаще) или приближающийся летальный исход (реже).

Также антинуклеарные антитела могут быть обнаружены у здоровых людей до 65 лет (3-5% случаев), после 65 (до 37%).

Показания

Исследовать антинуклеарный фактор целесообразно в следующих случаях:

  • Диагностика аутоиммунных и некоторых других системных заболеваний без ярко выраженной симптоматики;
  • Комплексная диагностика системной красной волчанки, ее формы и стадии, а также выбор тактики лечения и составление прогноза;
  • Диагностика лекарственной волчанки;
  • Профилактическое обследование пациентов с диагнозом красная волчанка;
  • Наличие специфических симптомов: продолжительная лихорадка без установленной причины, боли и ломота в суставах, мышцах, кожные высыпания, повышенная утомляемость и т.д.;
  • Наличие симптомов системных заболеваний: поражение кожи или внутренних органов (почки, сердце), артрит, эпилептические припадки и судороги, лихорадка, беспричинное повышение температуры и т.д.;
  • Назначение лекарственной терапии дизопирамидом, гидралазином, пропафеноном, прокаинамидом, ингибиторами АПФ, бета-блокаторами, пропилтиоурацилом, хлорпромазином, литием, карбамазепином, фенитоином, изониазидом, миноциклином, гидрохлортиазидом, статинами, поскольку есть риск развития лекарственной красной волчанки.

Кто дает направление

Помимо врача общей практики, направляют на анализ такие узкие специалисты, как

  • ревматолог,
  • дерматовенеролог,
  • нефролог,
  • педиатр.

Норма для АНА и факторы влияния

В норме антинуклеарные антител в плазме отсутствуют или определяются в небольшом количестве. Результат зависит от способа выполнения теста:

1. Тест делался методом ИФА

  • менее 0,9 пунктов – отрицательно (норма);
  • от 0,9 до 1,1 пунктов – сомнительно (рекомендуется сделать повторный тест через 7-14 дней);
  • более 1,1 пункта – положительно.

2. Для количественного анализа РНИФ нормой считается титр менее 1:160.
3. Иммуноблоттинг – норма «не обнаружено» (общее заключение / напротив каждого вида антител).

Что может повлиять на результат

  • нарушение правил подготовки пациентом или алгоритма венепункции медработником;
  • прием лекарственных препаратов (карбамазепин, метилдопа, пеницилламин, токаинид, нифедилин и др.);
  • наличие у пациента уремии (отравление продуктами белкового обмена) может дать ложноотрицательный результат.

Важно! Интерпретация результатов всегда проводится комплексно. Поставить точный диагноз на основании только одного анализа невозможно.

Антинуклеарные антитела в крови (результат положительный)

Обнаружение антинуклеарных антител может указывать на следующие заболевания:

  • системная красная волчанка ;
  • панкреатит (воспаление поджелудочной железы) аутоиммунной природы;
  • сахарный диабет I типа;
  • аутоиммунные поражения щитовидной железы;
  • злокачественные поражения внутренних органов;
  • аутоиммунный гепатит;
  • заболевания соединительной ткани;
  • миастения;
  • диффузный интерстициальный фиброз (поражение легочной ткани в хронической форме);
  • синдром Рейно (ишемия мелких концевых артерий) и т.д.

Повышение титра АНА при количественном иммуноферментном анализе (РНИФ) говорит о:

  • Системной красной волчанке в активной стадии – титр повышен до 98%;
  • Болезни Крона (гранулематозное поражение пищеварительного тракта) – около 15%;
  • язвенном колите (воспаление слизистой толстой кишки) – от 50 до 80%;
  • склеродермии;
  • болезни Шегрена;
  • Болезни Рейно – до 20%;
  • синдроме Шарпа (смешанное заболевание соединительной ткани);
  • лекарственной волчанке.

Важно! При расшифровке анализа важно понимать, что отрицательный результат не исключает наличия аутоиммунных нарушений у пациентов с характерной симптоматикой. Положительный результат без клинической картины аутоиммунного процесса необходимо интерпретировать с учетом данных других лабораторных анализов.

Подготовка

Биоматериал для проведения ИФА на антинуклеарный фактор – сыворотка венозной крови.

  • Венепункция выполняется в утреннее время и натощак (с момента последнего приема пищи должно пройти минимум 8 часов). Пить чистую негазированную воду можно;
  • Непосредственно перед забором крови (за 2-3 часа) не рекомендуется курить и пользоваться никотинозаменителями (пластырь, спрей, жевательная резинка);
  • Накануне и в день процедуры нельзя употреблять алкогольные и энергетические напитки, волноваться и заниматься тяжелой физической работой;
  • За 15 дней до теста по согласованию с лечащим врачом отменяется прием лекарственных препаратов (антибиотики, противовирусные, гормоны и др.);
  • Для получения достоверного результата анализ желательно повторить через 2 недели.

Ответ ИФА можно ожидать в течение 1 суток после венепункции, а в экстренных ситуациях, когда обследование проводится по «cito» – около 3 часов.

Источники:

  • Информация с сайтов лаборатории Инвитро и Хеликс ;
  • Данные Национальной медицинской библиотеки США PubMed .

Другие анализы ревматологического скрининга

> Определение содержания в крови антинуклеарного фактора (АНФ)

Данная информация не может использоваться при самолечении!
Обязательно необходима консультация со специалистом!

Что такое АНФ?

В организме некоторых людей может происходить генетически запрограммированный распад дефектных эпителиальных клеток, в результате которого образуются нуклеопротеиновые аутоантигены. Их схожесть с чужеродными вирусными частицами вызывает образование аутоантител, которые получили название антинуклеарных. Вследствие этого начинают формироваться иммунные комплексы (антиген + антитело), вызывающие иммунное воспаление в местах с особенно тонкими кровеносными сосудами (в почках, синовиальной оболочке суставов, коже, плевре, центральной нервной системе). Данный процесс характерен для системной красной волчанки, ревматических заболеваний, синдрома Шегрена (аутоиммунного поражения соединительной ткани) и других болезней.

Определение содержания антинуклеарного фактора (АНФ) – это и есть выявление в крови антинуклеарных антител. Последние могут встречаться у 1–3 % здоровых людей. С возрастом человека содержание АНФ в крови, как правило, увеличивается.

Показания к определению АНФ

Врачи назначают данное исследование для выявления риска развития и диагностики аутоиммунных заболеваний. Анализ на АНФ показан больным системной красной волчанкой, южной волчанкой, заболеваниями соединительной ткани, миопатией, полинейропатией, склеродермией (поражением мелких сосудов). Его назначают при аутоиммунном гепатите, некоторых видах цирроза печени, склерозирующем холангите (воспалении желчных протоков), а также при ювенильном артрите.

Определение содержания АНФ в крови позволяет доктору наблюдать за развитием заболевания и при необходимости корректировать лечение.

Где можно сдать анализ и как к нему подготовиться?

Направляют на данное исследование ревматологи, иммунологи, гепатологи, терапевты. Пройти его можно как в специализированных иммунологических центрах, так и в любых лабораториях, имеющих необходимые анализаторы и другое оборудование для проведения анализа.

Образец крови из вены необходимо сдавать после как минимум 4-х часов голодания.

Интерпретация результатов

АНФ в крови измеряется в титрах. Чем выше знаменатель дроби, показывающей разведение сыворотки, в которой определяют АНФ, тем большее количество антител находится в крови.

Титры от 1/640 свидетельствуют о высокой вероятности возникновения ревматических или аутоиммунных заболеваний. В случаях динамического наблюдения за системным заболеванием повышение титров АНФ обычно свидетельствует об обострении патологического процесса.

Низкие титры АНФ (до 1/160) выявляют у некоторых здоровых людей, особенно если последние имеют страдающих системными заболеваниями родственников. Достаточно низкие титры встречаются у больных многими аутоиммунными, онкологическими и инфекционными заболеваниями.

Помимо титра антител при проведении анализа лаборант описывает различные типы вызываемого антителами свечения ядер клеток, каждый из которых характерен для того или иного заболевания.

Недостатки анализа

При помощи определения содержания АНФ в крови не все антинуклеарные антитела могут быть выявлены ввиду их большого многообразия. Поэтому для исключения недостоверных результатов анализа рекомендуется проводить лабораторное исследование одновременно с ИФА и методом непрямой иммунофлюоресценции.

Отсутствие высоких титров антител не свидетельствует об отсутствии системных заболеваний, а лишь уменьшает вероятность их наличия или возникновения.

Давно я хотела написать про антинуклеарный фактор, но меня все время что-то останавливало. Почему? Ну потому что писать об этом — это пытаться объять необъятное, а краткость — явно не сестра моего таланта)))

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) -основной метод выявления антинуклеарных антител, который позволяет выявить большинство разновидностей антинуклеарных антител. Результатом определения АНФ является сам факт присутствия аутоантител, конечный титр разведения сыворотки и тип свечения ядра клетки.

АНФ-это не одно антитело!

Метод выявления АНФ был разработан Таном (1982), применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2 (вы могли видеть это название в бланке анализа). Это клеточная линия получена из опухоли гортани человека (аденокарциномы). Сравнительная неприхотливость этой линии, крупные ядра и присутствие всех человеческих антигенов сделало метод непрямой иммунофлюоресценции (нРИФ) с использованием перевиваемой клеточной линии НЕр-2 основным методом обнаружения АНФ.

В качестве субстратов могут применяться и другие клеточные линии (см карусель), однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линия Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. В англоязычной литературе иногда этот метод обозначают как FANA(Fluorescent AntiNuclear Antibody detection).

Иногда под термином «антинуклеарные антитела» иммунологические лаборатории называют тесты, как основанные на методах иммуноферментного и иммунохимическом анализе, так и метод иммунофлюоресценции.
Антинуклеарный фактор (АНФ) — это антитела, обнаруженные иммунофлюресцентным методом.
Необходимо выявлять АНФ класса IgG, так как выявление АНФ, представленных другими классами иммуноглобулинов не имеет самостоятельного значения.

Титр АНФ определяется как последнее разведение сыворотки больного, которое обладает четкой флюоресценцией (свечением) ядер клеток. При использовании клеточной линии НЕр-2 рекомендуется использовать исходный титр 1:80, в этом случае в норме титры АНФ менее 1:160. Для определения конечного титра обычно используется титрование шагом х2 (1:160-1:320 — 1:640 — 1:1280 – 1:2560 – 1:5120 и т.д.).

На фоне обострения заболевания обычно отмечаются титры АНФ более 1:640, а при ремиссии титры могут снижаться до 1:160-1:320.

Балльная оценка результатов выявления («в крестах» +++) позволяет лабораториям экономить реактивы и уменьшить трудозатраты на выполение исследований. В этом случае определение конечного титра не представляется возможным❌

Желательно определять конечный титр у всех положительных больных, что позволяет уточнять присутствие в сыворотке аутоантител, которые более тесно связаны с активностью процесса.

ТИПЫ СВЕЧЕНИЯ ЯДРА

Тип свечения ядра — одна из ключевых характеристик при выявлении АНФ. Каждая разновидность антинуклеарных антител (ANA) имеет конкретные мишени в клетке и отражает взаимодействие сыворотки больного с структурами внутри клетки. Тип свечения зависит от присутствия конкретных аутоантител в крови, на основе чего, можно сделать предварительное заключение относительно тех разновидностей антител, которые имеются в данной сыворотке. Тип свечения ядра клетки значительно увеличивает информативность выявления АНФ.

Использование клеток линии НЕр-2 позволяет охарактеризовать более 20 различных вариантов окрашивания ядра, однако для клинической практики достаточно выделить основные. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

При гомогенном типе свечения аутоантитела реагируют с теми антигенами, которые распределены в ядре диффузно, т.е. входят в состав хроматина.

За счёт чего? Антитела против нуклеосом, ДНК, гистонов.

Когда? У больных с СКВ и лекарственной волчанкой, а также у больных со склеродермией.

Часто обнаружение высокого титра АНФ с гомогенным типом свечения указывает на диагноз СКВ.

Периферический тип свечения могут выделять отдельно, хотя он является разновидностью гомогенного. Периферический тип свечения обнаруживается у больных с антителами к двуспиральной ДНК и выявляется преимущественно при СКВ, заболеваниях печени.

Гранулярный тип (крапчатый, сетчатый) является наиболее частым встречающимся и, одновременно, наиболее неспецифическим.

За счёт чего? Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA.

Когда? СКВ, болезнь/синдром Шегрена, склеродермия, дерматомиозит/полимиозит, РА и ряда других болезней. Низкие титры (1:160-1:320) АНФ с гранулярным типом свечения могут быть в сыворотках крови у клинически здоровых лиц БЕЗ признаков системного заболевания.

Выявления очень высоких титров АНФ (1:2560-1:10000) с крупногранулярным типом свечения ядра обычно указывает на диагноз и требует дообследования для выявления RNPантигена.

Антигены ядрышка могут выступать в качестве мишеней АНА, что приводит к обнаружению ядрышкового типа флюоресценции.

За счёт чего? PHК полимераза 1, NOR, U3RNP, PM/Scl.

Когда? Склеродермия и ее разновидности.

Центромерный тип отмечается при появлении антител к центромерам хромосом, и обнаруживается только в делящихся клетках. Его присутствие характерно при CREST-синдроме (вариант склеродермии).

Цитоплазматический тип свечения.

За счёт чего? Антитела к тРНК–синтетазам, в частности Jo-1, которые отмечаются при полимиозите. Кроме того, он выявляется у больных с АНА, направленными против других компонентов цитоплазмы клетки: при аутоиммунном гепатите, при первичном билиарном циррозе.

Можно охарактеризовать ряд других разновидностей свечения. Антитела к Scl-70 дают мелкогранулярное окрашивание ядра и ядрышек, анти-р80 — светящиеся точки в ядре, которые отсутствуют в митотических клетках.

Нередко может встречаться сочетание нескольких типов свечения, например мелкогранулярного и ядрышкового, что характерно для антител к Scl-70.

Иногда в низких разведениях преобладает один тип свечения, например гранулярный, а при дальнейших разведениях выявляется гомогенный или центромерный типы флюоресценции, что свидетельствует о наличии в сыворотке больного различных видов АНА.